Оттаивание и оценка спермы в гранулах. Гранулы могут быть двух видов: объемом 0,5 мл, не требующие дополнительного разбавления, и концентрированные объемом 0,1-0,2 мл требующие дополнительного разбавления 2,9%-ным раствором лимоннокислого натрия.
Гранулы объемом 0,5 мл оттаивают следующим образом. Две гранулы по 0,5 мл (доза) кладут во флакон, предварительно помещенный в сосуд с теплой водой (40-45°С). Флакон с гранулами, не вынимая из воды, осторожно вращают круговыми движениями до растаивания гранул, после чего, вынимают из воды и ставят на стол при комнатной температуре 18-20°С. Время от- I таивания двух гранул - 1,5-2 минуты.
Гранулы объёмом 0,1 -0,2 мл оттаивают следующим образом. Одну гранулу 0,1 или 0,2 мл (доза) помещают во флакон или ампулу с 1 мл 2,9%-ного раствора лимоннокислого натрия, I предварительно подогретого до температуры 40-42°С. Флакон I или ампулу, не доставая из воды, осторожно покачивают до рас- I таивания гранул, после чего, сразу вынимают из воды и ставят j на стол при температуре 18-20°С.
Гранулы объемом 0,1-0,2 мл оттаивают за 5-8 секунд.
Категорически запрещается оттаивать гранулы при ком- I натной температуре.
Оттаянная сперма оценивается по общепринятой методике I Биологическое исследования замороженной спермы быков I проводят первый раз через 24 часа после замораживания, и вто- I рой раз - при передаче в стационарное хранилище (банк спер- I мы). Сперма находится на карантинном сроке 28 дней.*
-
Замороженная сперма быка должна соответствовать мини-1
-
мальным требованиям по ее качеству: подвижность спермиев - 1 3 балла, живых (эозинотрицательных) - 35%, выживаемость! спермиев не ниже 5 часов.
Активность оттаянной спермы (каждой гранулы в отдель?! ности) проверяют под микроскопом при-увеличении в 140-280 ] раз с использованием обогревательного столика Морозова или столика-термостата при температуре 40-42 С.
К использованию допускается сперма с активностью после оттаивания не ниже 0,3 балла (т.е. не менее 30% спермиев должны двигаться прямолинейно-поступательно).
После размораживания сперму надо использовать в течение 20-30 минут.
5. Хранение спермы
Хранение спермы вне организма имеет цель увеличить I срок выживаемости спермиев и их оплодотворяющей способности в замороженном или не замороженном состоянии, основан ! ного на снижении обменных процессов в сперме, при которых I они впадают в анабиоз (рис. 9,10).
;........... ......................... . ..................
Рисунок 9 - Закладка семени на карантинное хранение
Рисунок 10 - Длительное хранение семени в стационарном хранилище
Существует несколько методов хранения спермы:
♦ кратковременное хранение спермы при плюсовых температурах;
♦ длительное хранение в замороженном состоянии в жидком азоте.
При кратковременном хранении спермы при температуре 2-5°С свежеполученную сперму после оценки ее качества разбавляют средой и проверяют снова под микроскопом на активность спермиев, а затем фасуют.
Сперму фасуют в стерильные стеклянные или полиэтилен-, новые ампулы, пробирки объемом по 1 мл. Для предупреждения гибели спермиев от температурного шока сперму охлаждают до температуры 2-5 С. постепенно в течение 2-3 часов. Вначале разбавленную сперму помещают в стеклянный стакан с теплой водой температурой 30 С, затем переносят в водяную баню температурой 22°С на 20 минут, после чего производят фасование.
