Среды состоят из нескольких компонентов, каждый из которых выполняет определенную биологическую роль. Для приготовления синтетических сред используют следующие вещества:
-
♦ Глюкоза медицинская (ГОСТ 6038-74) молекулярная
-
масса 198,7 г. Белый гигроскопический порошок сладкого вкуса. Является питательным энергетическим материалом и сохраняет электрический заряд спермиев;
-
♦ Лактоза (молочный сахар) в порошке (ТУ 46-83072), мо
-
лекулярная масса 360,32 г со слабым сладковатым вкусом, легко растворим в воде;
-
♦ Калий фосфорнокислый однозамещенный (ГОСТ 4198-
-
75), молекулярная масса 136,1 г. Прозрачные крупные кристаллы иногда кристаллический порошок. Вкус слабокислый;
-
♦ Натрий лимоннокислый, трехзамещенный, пятиводный
-
(ГОСТ 51314-72), молекулярная масса 348,1 г. Белые кристаллы или мелкокристаллический порошок, вкус слабощелочной, обладает буферными свойствами, понижает набухание коллоидов, уменьшает проницаемость оболочки спермиев, нейтрализует кальций, свободные ионы, которые вредно действуют на спермин;
-
♦ Натрий двууглекислый (ГОСТ 4201-66), молекулярная
-
масса 84,01 г, белый порошок;
-
♦ Магний сернокислый (ГОСТ 4523-67), молекулярная
-
масса 246,48 г. Бесцветные кристаллы;
-
♦ Лимонная кислота (ГОСТ 3652-69), молекулярная масса
-
192,126 г. Кристаллический порошок, хорошо растворим в воде; ♦ Калий хлористый (ГОСТ 4234-69), молекулярная масса
-
74,5 г, бесцветные кристаллы;
-
♦ Аммоний’сернокислый очшценный (ГОСТ 10873-73), мо
-
лекулярная масса 132,15 г. Бесцветный кристаллический порошок, хорошо растворимый в воде;-
-
♦ Спермосан-3 (ГОСТ 22636-77). Препарат, представляю
-
щий собой смесь бензилпенициллина, стрептомицина сульфата и стрептоцида, предназначенный для санации спермы производителей сельскохозяйственных животных.
♦ Глицерин (ГОСТ 6259-71) - густая, прозрачная, гигроскопическая жидкость, смешивающаяся с водой;
♦ Желток куриного яйца - получают из свежих куриных яиц, содержит 7% не окисленного лецигина, который предохраняет спермии от температурного шока, способствует сохранению оболочки спермиев. Лецитин также используется как питательное вещество;
♦ Дистиллированная вода (ГОСТ 6709-72) - вода, подвергнутая очистке ггосредством перегонки.
Техника приготовления синтетических сред. Для разбавления спермы применяют синтетические среды, выпускаемые в виде сухих заготовок или приготовленные из отдельных компонентов перед применением.
В стерильную химическую колбу наливают необходимый объем прокипячеггной дистиллированной воды отмерив мерным цилиндром и добавляют все компоненты, за исключением санирующих препаратов, глицерина и желтка.
Приготовленную среду стерилизуют в водяной бане 5-10 минут с момента закипания воды в бане, затем охлаждают до 3540°С и добавляют спермосан-3, глицерин, желток.
Колбу со сггермой накрывают стерильной пергамеггтной бумагой и фиксируют резиновым кольцом.
Яйца перед использованием моют, протирают спиртовым тампоном, раскалывают пополам, сливают белок в банку, а желток осторожно перекладывают на стерильный лист фильтровальной бумаги, прокалывают его оболочку и сливают в измерительную мензурку. Подготовленный желток вносят в колбу с синтетической средой. Температура среды перед разбавлением должна быть одинаковой с температурой спермы.
Среда должна быть использована в течение 3-4 часов с момента ее приготовления.
Качество синтетической среды определяют биологическим путем - по длительности выживаемости спермиев при различных разбавлениях спермы, сохраняемой при температуре 2-5°С.
Техника разбавления спермы синтетическими средами. Если ггосле предварительной оценки сперма производителя при-
знана годной, ее непосредственно в спермоприемнике разбавляют 1:1 или 1:2 и после 5-10-минутной выдержки переливают в градуированный смеситель емкостью 100-200 мл, измеряют объем. Разбавитель температурой 25-30 С небольшими порциями вводят по стенке в смеситель или в колбу со спермой и смешивают после добавления каждой порции.
В зависимости от подвижности и концентрации спермиев сперму быка разбавляют в 20-50 и более раз с таким расчетом, чтобы в одной дозе разбавленной спермы для всех способов хранения перед осеменением было не менее 10 млн. спермиев с ППД 3 балла (30%).
Разбавление спермы ЛФРМГЖ-средой для замораживания в соломинках. Сухие заготовки среды вносят в стерильную колбу, добавляют необходимый объем прокипяченной дистиллированной воды температурой 70-80°С, растворяют, охлаждают до 30-32°С и вносят спермосан-3, глицерин и желток (табл. 19).*
Таблица 19 '
Синтетическая среда лактозо-фруктозо-раффинозо-магниевоглицерино-желточная (ЛФРМГЖ)
| Компоненты | Норма |
|---|---|
| Лактоза, г | 80,5 |
| Фруктоза, г | 12,0 |
| Раффиноза пятиводная, г | 19,5 |
| Магний сернокислый, г | од |
| Глицерин, мл | 50,0 |
| Спермосан-3, тыс.ед. | 500-700 |
| Желток куриных яиц, мл | 200,0 |
| Вода дистиллированная, мл | 1000,0 |
При отсутствии сухих заготовок среды компоненты стерилизуют ультрафиолетовыми лучами в бактерицидной камере в течение 15-20 мин, отвешивают на аналитических весах и готовят среду, как указано выше.
