кювету или чашку Петри для исследований под лупой. Так как одни гельминты хорошо видны на белом фоне, а другие на черном, то для более полной выборки гельминтов чашку Петри ставят то на белую, то на черную бумагу. Гельминтов выбирают препаровальной иглой или кисточкой, а затем микроскопируют для установления вида.
Метод отсеивания . При этом методе используют набор из 2–4 металлических сит с отверстиями убывающего диаметра. Струей воды промывают фекалий, при этом частицы фекалии уносятся водой, а гельминты в зависимости от величины задерживаются на разных ситах. Затем гельминтов выбирают и исследуют. Этим методом можно собирать гельминтов разной величины.
Гельминтоовоскопия (от латинского ovum – яйцо, греческого skopeo – смотрю) объединяет группу методов исследования, с помощью которых выявляют яйца возбудителей гельминтозов.
Предложено много методов овоскопии, но не все они заслуживают практического применения. Одни методы сложны по технике выполнения, при исследовании другими требуется значительное время, третьи – малоэффективны. В данном пособии мы приведем только наиболее эффективные методы гельминтоовоскопии.
Удельный вес яиц тяжелее обычной воды, вследствие этого яйца гельминтов, как более тяжелые частички вымываются из фекалий водой и оседают на дно сосуда с различной скоростью, в зависимости от удельного веса. Быстрее всего оседают яйца более крупного размера. В растворах же солей высокого удельного веса яйца гельминтов наоборот всплывают (явление флотации) в верхний слой и концентрируются в нем.
На использовании этих физических закономерностей основана технология всех современных методов гельминтоовоскопии, которые подразделяются на три группы: осаждения, флотации и комбинированная. Методы осаждения (седиментации) основаны на принципе осаждения взвешенных в жидкости яиц гельминтов, промывки осадка и исследования его. Эти методы применяются в основном для диагностики тех гельминтозов, возбудители которых выделяют яйца с высоким удельным весом (фасциолез, дикроцелиоз, описторхоз и др.). Методы осаждения менее эффективны и более трудоемки, чем флотации. Это связано со сложностью отыскания яиц гельминтов в осадке взвеси.
Метод последовательных смывов. Пробу фекалий 3-5г кладут в стакан, вливают небольшое количество воды и размешивают палочкой или пинцетом до получения жидкой кашицеобразной массы, затем добавляют воду порциями до объема 50 мл при постоянном размешивании. После взвесь процеживают через металлическое сито в другой стакан, в нем отстаивают в течение 5–10 мин. Затем верхний слой жидкости над осадком сливают, а к осадку добавляют новую порцию воды и вновь отстаивают в течение 5–10 мин. Описанная процедура повторяется до тех пор, пока вода не станет прозрачной. Ее в последний раз сливают, а осадок (около 5 мл)
разливают на предметные стекла или стекла большего размера (12х19) и микроскопируют. Этот метод широко применяется в ветеринарных лабораториях для диагностики трематодозов у жвачных животных. Вместе с тем, она трудоемка и по диагностической эффективности значительно уступает специальным флотационным и комбинированным методам гельминтоовоскопии.
Флотационные методы. Все методы флотации (от англ. flotathion – всплывание) основаны на единой физической закономерности, обеспечивающей всплытие яиц гельминтов в насыщенных растворах солей. Для этого рекомендуются растворы различных солей, но предпочтительнее – дешевых и повсеместно доступных. Отдельные методы флотации называются по именам авторов, впервые предложивших ту или иную соль для приготовления флотационной жидкости.
Метод Фюллеборна. Для исследования по этому методу нужен насыщенный раствор поваренной соли, который готовят путем кипячения 400-420 г соли в 1 л воды.
Пробу фекалий весом 3–5 г помещают в стакан, заливают небольшим количеством флотационной жидкости, тщательно размешивают, затем добавляют 50–100 мл этого раствора и процеживают через металлическое сито или один слой марлевой салфетки в сухой, чистый стакан. Взвесь отстаивают 40–60 мин, затем прикосновением петли снимают поверхностную пленку, переносят ее на предметное стекло для микрокопирования.
Этот метод в отечественной лабораторной практике может применяться для диагностики аскариоза, неоаскариоза, параскариоза, стронгилятозов, стронгилоидозов, мониезиоза, тизанезиоза, авителлиноза жвачных.
Плотность насыщенного раствора поваренной соли составляет 1,18 – 1,20, тогда как удельный вес оплодотворенных яиц аскарисов равен 1,10 – 1,14, у неоплодотворенных – 1,26, а трихоцефал – 1,16–1,22. Поэтому при использовании насыщенного раствора поваренной соли всплывают только часть яиц аскарисов и трихоцефал, по этой причине диагностическая эффективность данной методики невысокая. Кроме того, раствор на предметном стекле быстро кристаллизуется.
Метод Калантарян – это видоизмененный метод Фюллеборна. Вместо насыщенного раствора поваренной соли применяют раствор нитрата натрия (NaNO3) с удельным весом 1,38. Для приготовления раствора 1 кг нитрата натрия растворяют в 1 л кипящей воды. Метод простой, дешевый, а эффективность выше метода Фюллеборна. Нитрат натрия как минеральное удобрение доступен для любого ветеринарного учреждения. Этот метод применяют в основном для диагностики нематодозов, в частности аскаридатозов, трихоцефалезов и др., а также для диагностики цестодозов и некоторых трематодозов (дикроцелиоз).
Метод Котельникова-Хренова с аммиачной селитрой. Технология этого метода такая же, как и метода Фюллеборна, но в качестве флотационной жидкости применяется нитрат аммония (техническая гранулированная аммиачная селитра), используемый для удобрений. При приготовлении флотационной жидкости в 1 л кипящей воды растворяют 1,5 кг селитры. Плотность раствора – 1,30. Поверхностную пленку можно микроскопировать через 10 мин.
В лабораторной практике эта методика широко применяется для выявления яиц аскарисов, трихоцефалюсов, эзофагостом и метастронгилюсов свиней, неоаскарисов, стронгилят пищеварительного тракта, трихоцефалюсов, авителлинид жвачных, параскарисов и стронгилят лошадей, токсокар и токсаскарисов собак, кошек, песцов, лисиц и других плотоядных, стронгилоидесов животных разных видов, аскарисов и гетеракисов кур.
Недостатком этого метода является то, что флотационная жидкость из аммиачной селитры не способна поднять тяжелые яйца трематод (фасциол, дикроцелиумов, описторхисов и др.), т.к. удельный вес этих яиц больше чем 1,3, Кроме того раствор быстро кристаллизуется.
Метод Котельникова-Хренова с нитратом свинца . Техника проведения этого метода аналогична методу Фюллеборна. В качестве флотационной жидкости при этом используется насыщенный раствор нитрата свинца (Pb(NO3)2) из расчета 0,65 кг на 1 л воды. Плотность этой жидкости достигает 1,5. Применение такого флотационного раствора дает возможность диагностировать широкий круг возбудителей гельминтозов и с его помощью легко выявляются и тяжёлые яйца фасциол (удельный вес 1,31–1,35, парамфистом (1,33–1,38), дикроцелий (1,3) и ещё быстрее яйца с меньшим удельным весом, аскарисов, стронгилят, метастронгилюсов, трихоцефал, стронгилоидесов, аноплоцефал, мониезий), тениат, скребней (макроканторинхусов), а также капсулы тизаниезий.
Недостатком данной методики является дороговизна нитрата свинца. Вместе с тем, при работе c таким раствором петли покрываются белым налетом (нитрат свинца входит в химическую реакцию с металлами), яйца трематод сильно деформируются, что создает определенные трудности при исследовании. Кроме того, используемый препарат является солью тяжелого металла – свинца, который является высокоядовитым веществом, что создает опасность для здоровья исследователей и окружающих, отработанные растворы данного препарата запрещено сливать в канализационные стоки. По совокупности этих причин, указанная методика не нашла широкого применения на практике.
В качестве флотационных жидкостей авторами также были предложены растворы из следующих солей: тиосульфата натрия – 1,75 кг препарата на 1л воды, ρ–1,40 (метод Болховитинова), карбоната калия – 0,6 кг на 1 л воды, ρ–1,41 (метод Вольфа). Однако эти методы по тем или иным причинам также не нашли широкого применения на практике.
