донорам препаратов, содержащих ФСГ и ЛГ, каждые 12 часов в течение 4-5 дней в общей дозе 30-50 единиц Арморовского стандарта (Арм.ед.) или 7001000 междунароных единц (МЕ) и с последующим введением простагландина F2α через 48 часов после первой инъекции ФСГ.
Для оптимизации процедуры индукции суперовуляции препаратами, содержащими гипофизарный ФСГ, разрешено их применение в виде однократной инъекции композиции полной дозы препарата (30-50 Арм.ед. или 700-1000 МЕ) с пролонгатором – полиэтиленгликоль (ПЭГ) и последующее через 48 часов после инъекции этой композиции (препарат ФСГ+ПЭГ) введение препарата простагландина F2α. Для снижения вариативности ответной реакции, повышения результативности индукции суперовуляции и выхода пригодных к использованию в репродукции эмбрионов допустима обработка доноров биологически активными препаратами (витамины, стимуляторы, пептиды). Повторную процедуру индукции суперовуляции у доноров эмбрионов проводят по прошествии как минимум одного полового цикла.
Для индукции суперовуляции применяют различные схемы гормональной обработки. Наиболее используемыми являются следующие схемы:
Схема 1
Индукция суперовуляции с применением
сывороточного гонадотропина (ГСЖК)
| День эстрального цикла | Препарат/ мероприятие | Доза |
|---|---|---|
| 2 10-12 12-14 14-16 21-23 | Витамин ГСЖК; Витамин Простагландин F2α ЛГ (Гн/Рг)/ Охота и осеменение, Вымывание эмбрионов | 10 мл 2500-3000 М.Е.; 10 мл 4 мл 5 мл |
Схема 2
Индукция суперовуляции с применением
гипофизарного гонадотропина (ФСГ)
| День эстрального цикла | Препарат/ мероприятие | Доза |
|---|---|---|
| 10 | ФСГ | утро – 2,5 мл / вечер – 2,5 мл |
| 11 | ФСГ | утро – 2,0 мл / вечер – 2,0 мл |
| 12 | ФСГ | утро – 1,5 мл / вечер– 1,5 мл |
| 13 | ФСГ - простагландин F2α | утро – 1 мл – 3 мл /вечер – 1 мл – |
| 15 | Охота и осеменение | 1,5 мл |
| 22 | Вымывание эмбрионов |
Применяемые с целью индукции суперовуляции гормональные препараты должны быть допущены к использованию на территории РФ, иметь не истѐкший срок годности и храниться в условиях согласно инструкции и требованиям к применению и хранению гормональных препаратов.
После проведения процедуры индукции суперовуляции составляют акт (см. приложения), где указывают название препарата, его серию, дату выпуска и срок годности, производителя и протокол (схему) введения.
3.4. Осеменение доноров эмбрионов. Требования, предъявляемые к семени и быкам- производителям
Осеменением должны заниматься высококвалифицированные техники, знающие особенности охоты у суперовулировавших доноров.
Для осеменения доноров применяют цервикальный метод введения спермы. Осеменение доноров проводят с применением стерильных инструментов одноразового использования. Наиболее предпочтителен ректоцервикальный способ, позволяющий контролировать состояние половых органов коров и более глубоко вводить сперму в тело матки. При проведении процедуры искусственного осеменения необходимо следовать правилам:
-
1) доноров следует осеменять трижды с 12-часовым интервалом;
-
2) семя необходимо оттаивать в теплой воде (35-37 °С) в течение 15-20 сек.;
-
3) инструмент рекомендуется проводить через шейку матки как при обычном искусственном осеменении;
4) введение спермы в один из рогов матки при осеменении донора недопустимо. Лучшим способом считается введение спермы поровну в каждый из рогов матки.
Отсутствие признаков полового возбуждения у донора в период осеменения может свидетельствовать о низкой реакции яичников на введѐнные гонадотропины. Таких коров выявляют до 5-7 %.
При отсутствии признаков охоты у суперовулировавших доноров либо повторяют обработку, либо проводят обычное осеменение.
Повторные слизистые выделения у донора через 2-3 дня после осеменения свидетельствуют о низкой вероятности получения жизнеспособных эмбрионов при вымывании, так как в яичниках, на месте фолликулов, не образовались полноценные желтые тела. При увеличении числа таких случаев по стаду специалистам необходимо обратить внимание на условия содержания и полноценность кормления доноров.
Для осеменения коров-доноров используют семя выдающихся быковпроизводителей, проверенных по качеству потомства, признанных улучшателями по селекционным признакам, прошедших молекулярно-
генетические и цитогенетические исследования на предмет отсутствия наследственных заболеваний и стабильности генетического аппарата.
Подбор производителей и коров-доноров ведется в соответствии с планом селекционно-племенной работы.
С целью получения удовлетворительных результатов суперовуляции рекомендуют использовать дозу спермы от 20 млн. и более живых спермиев с прямолинейно-поступательным движением.
Семя для осеменения самок-доноров должно быть получено и обработано согласно положениям Главы 4.6 кодекса здоровья наземных животных МЭБ.
После проведения процедуры по осеменению донора составляют акт, где указывают все характеристики быка, чье семя использовалось, количество затраченных доз семени и т.д. (см. приложения).
3.5. Учет реакции и извлечение эмбрионов
Вымывание эмбрионов проводят на 7-8-й день после осеменения. Первый день эстрального цикла доноров принимают за ноль. Перед вымыванием эмбрионов из матки донора проводят учет реакции яичников на введение гонадотропинов. Непосредственно перед вымыванием эмбрионов проводят подсчет желтых тел и неовулировавших фолликулов. Следует учитывать, что полноценное желтое тело при ректальной пальпации представляет собой бугорок, твердый на ощупь и имеющий на верхушке небольшое углубление - «ямку», а неовулировавшие фолликулы - флюктуируют и имеют нечѐткие границы.
Эффективность получения эмбрионов во многом зависит от способа их извлечения, квалификации персонала, правильного использования приборов и инструментов.
Вымывание эмбрионов современными устройствами имеет ряд преимуществ: относительная простота исполнения, без риска нарушить воспроизводительную способность животных и повторного использования их в качестве доноров. Для вымывания эмбрионов не требуется специального операционного помещения, что позволяет успешно применять его непосредственно на животноводческих фермах.
Процедура вымывания эмбрионов представляет собой подачу промывочного раствора в рога матки самки-донора, орошения внутренней полости рога матки с целью смыва находящихся там эмбрионов, забора промывочного раствора с эмбрионами из рога матки, сбор его в специальный сосуд и/или локализации вымытых эмбрионов в эмбриосборнике.
Для проведения процедуры вымывания эмбрионов необходимо иметь фиксационный станок; катетеры для извлечения эмбрионов и необходимые к
