ним вспомогательные инструменты (стилеты, мандрены, манжетки и т.д); системы для подачи и оттока промывочной среды, состоящие из гибких шлангов и трубок с зажимами; шприцы и устройства для подачи и забора промывочного раствора; промывочные среды, представляющие собой буферные растворы с добавленными к ним питательными веществами и антибиотиками; устройства и фильтры для локализации вымываемых эмбрионов; терапевтические средства для расслабления матки и прямой кишки донора.
Инструменты и устройства для проведения процедуры вымывания, сбора и локализации эмбрионов могут быть различной модификации и отличаться техническими характеристиками.
Методы извлечения эмбрионов способом вымывания их из матки зависят от модификации и технических характеристик используемого инструментария и могут быть разными по своему техническому исполнению:
-
Метод «шприцевания» – оператор вводит двуканальный катетер в рог матки донора, далее через катетер путем нагнетания промывочный раствор подаѐтся в дозах 20-60 мл в рог матки донора и забирается оттуда путем отсоса при помощи шприца Жане, на каждый рог матки используют 300-500 мл промывочного раствора;
-
Метод «самотѐка» – двуканальный катетер вводят в рог матки, и через него промывочный раствор самотѐком подается по системе трубок во внутреннюю полость рога матки, в дозе 20-60 мл, затем подачу прекращают, перекрыв подающий канал системы. Далее технолог проводит манипуляции с рогом матки, открывает заборный канал системы, и промывочный раствор с эмбрионами через катетер по системе трубок поступает в эмбриосборник или сосуд для его сбора. При этом методе можно использовать и трехканальный катетер, при этом необходимость прерывания циклов подачи и забора промывочного раствора отпадает, так как конструкция такого катетера позволяет проводить эти этапы синхронно. Для промывания одного рога матки используют 300-500 мл промывочного раствора.
-
Комбинированный метод – через установленный в роге матки двуканальный катетер по подающему каналу системы промывочный раствор при помощи нагнетательного устройства (шприц, насос, помпа) в дозах 20-60 мл поступает во внутреннюю полость рога матки, затем подающий канал системы перекрывают, технолог проводит манипуляции с рогом матки, открывают заборный канал системы, и промывочный раствор с эмбрионами
через катетер по системе трубок поступает в эмбриосборник или сосуд для его сбора. При использовании трехканального катетера необходимость прерывания циклов подачи и забора промывочного раствора отпадает, так как конструкция такого катетера позволяет проводить эти этапы синхронно. Для промывания одного рога матки используют 300-500 мл промывочного раствора.
Промывочные растворы, которые используются для вымывания эмбрионов, содержащие биологические продукты животного происхождения, не должны содержать патогенных микроорганизмов. Среды и растворы, используемые для вымывания эмбрионов, стерилизуют принятыми способами, описанными в Руководстве IETS (Международного общества пересадки эмбрионов), и подвергают манипуляциям в условиях, гарантирующих поддержание стерильности. Антибиотики должны добавляться в среды, используемые для отбора, манипуляции, промывки и хранения, согласно рекомендациям Руководства IETS.
Процедуру вымывания эмбрионов проводят, соблюдая все правила обращения с животными, техники безопасности и с соблюдением норм и правил ветеринарного контроля. После проведения процедуры вымывания эмбрионов составляют акт (см. приложения), где указывают все характеристики донора, применяемый метод, все характеристики используемого промывочного раствора.
3.6. Требования, предъявляемые к эмбрионам, полученным методом in vivo , и к условиям их обработки.
При получении эмбрионов методом in vivo проводят вымывание эмбрионов из матки донора на 7- 8 день после первого осеменения. Полученные таким способом эмбрионы коров подвергают микроскопическому исследованию при помощи стереомикроскопа или бинокулярной лупы при 150200-кратном увеличении. Характеризуют и классифицируют их согласно ГОСТ 28424-2014 «Средства воспроизводства. Эмбрионы крупного рогатого скота. Технические условия» ( далее- ГОСТ 28424-2014) .
При работе с эмбрионами соблюдают все предписания и правила, отраженные в ГОСТ 28424-2014, в кодексе здоровья наземных животных МЭБ (глава 4.7 статья 4.7.5) и ветеринарном законодательстве РФ.
В плане распространения болезней пересадка эмбрионов, полученных in vivo , представляет собой метод передачи генетического материала, несущий низкий риск.
Вне зависимости от вида животных процесс получения и трансплантации
эмбрионов делится на три этапа, определяющие окончательный уровень риска:
1) Первый этап, относящийся к болезням, не входящим в категорию 1 по классификации IETS (Международного общества пересадки эмбрионов) (Статья 4.7.14. кодекса здоровья наземных животных), касается вероятности риска заражения эмбрионов, который зависит от:
а) эпизоотического положения региона;
б) ветеринарного состояния поголовья или стада и доноров, от которых получают эмбрионы;
в) патогенности возбудителей, от которых региональные органы ветеринарного контроля стремятся защитить свою территорию.
2) На втором этапе ведѐтся снижение риска с помощью международных принятых процедур обработки эмбрионов, которые определены в Руководстве IETS и ГОСТ 28424-2014.Такие процедуры включают следующие действия:
а) эмбрионы должны промываться минимум десятикратно при минимальном разведении 1/100 между каждой промывкой, а для переноса эмбрионов между промывками каждый раз должна обязательно использоваться новая пипетка;
б) допускается групповая промывка исключительно эмбрионов, взятых у одного животного, а их число не должно превышать десяти в каждой промывке;
в) после промывки исследуют блестящую оболочку каждого эмбриона по всей поверхности для исключения еѐ повреждении и отсутствия посторонних включений.
г) при транспортировке к эмбрионам должны прилагаться необходимые документы, подписанные ответственным ветеринарным врачом группы по получению эмбрионов, в котором подтверждается проведение указанной обработки эмбрионов.
Среды, используемые при обработке и промывки эмбрионов, в состав которых входят биологические продукты животного происхождения, не должны содержать патогенных микроорганизмов.
Среды и растворы, используемые для обработки и хранения эмбрионов, стерилизуют принятыми способами, описанными в Руководстве IETS, и подвергают манипуляциям в условиях, гарантирующих поддержание стерильности.
Антибиотики должны добавляться в среды, используемые для отбора, манипуляции, промывки и хранения, согласно рекомендациям Руководства IETS.
После проведенных лабораторных исследований составляют акт, где отражают все характеристики полученных эмбрионов (см. приложения).
