♦ Глицерин (ГОСТ 6259-71) - густая, прозрачная, гигроскопическая жидкость, смешивающаяся с водой;
♦ Желток куриного яйца - получают из свежих куриных яиц, содержит 7% не окисленного лецигина, который предохраняет спермии от температурного шока, способствует сохранению оболочки спермиев. Лецитин также используется как питательное вещество;
♦ Дистиллированная вода (ГОСТ 6709-72) - вода, подвергнутая очистке ггосредством перегонки.
Техника приготовления синтетических сред. Для разбавления спермы применяют синтетические среды, выпускаемые в виде сухих заготовок или приготовленные из отдельных компонентов перед применением.
В стерильную химическую колбу наливают необходимый объем прокипячеггной дистиллированной воды отмерив мерным цилиндром и добавляют все компоненты, за исключением санирующих препаратов, глицерина и желтка.
Приготовленную среду стерилизуют в водяной бане 5-10 минут с момента закипания воды в бане, затем охлаждают до 3540°С и добавляют спермосан-3, глицерин, желток.
Колбу со сггермой накрывают стерильной пергамеггтной бумагой и фиксируют резиновым кольцом.
Яйца перед использованием моют, протирают спиртовым тампоном, раскалывают пополам, сливают белок в банку, а желток осторожно перекладывают на стерильный лист фильтровальной бумаги, прокалывают его оболочку и сливают в измерительную мензурку. Подготовленный желток вносят в колбу с синтетической средой. Температура среды перед разбавлением должна быть одинаковой с температурой спермы.
Среда должна быть использована в течение 3-4 часов с момента ее приготовления.
Качество синтетической среды определяют биологическим путем - по длительности выживаемости спермиев при различных разбавлениях спермы, сохраняемой при температуре 2-5°С.
Техника разбавления спермы синтетическими средами. Если ггосле предварительной оценки сперма производителя при-
знана годной, ее непосредственно в спермоприемнике разбавляют 1:1 или 1:2 и после 5-10-минутной выдержки переливают в градуированный смеситель емкостью 100-200 мл, измеряют объем. Разбавитель температурой 25-30 С небольшими порциями вводят по стенке в смеситель или в колбу со спермой и смешивают после добавления каждой порции.
В зависимости от подвижности и концентрации спермиев сперму быка разбавляют в 20-50 и более раз с таким расчетом, чтобы в одной дозе разбавленной спермы для всех способов хранения перед осеменением было не менее 10 млн. спермиев с ППД 3 балла (30%).
Разбавление спермы ЛФРМГЖ-средой для замораживания в соломинках. Сухие заготовки среды вносят в стерильную колбу, добавляют необходимый объем прокипяченной дистиллированной воды температурой 70-80°С, растворяют, охлаждают до 30-32°С и вносят спермосан-3, глицерин и желток (табл. 19).*
Таблица 19 '
Синтетическая среда лактозо-фруктозо-раффинозо-магниевоглицерино-желточная (ЛФРМГЖ)
| Компоненты | Норма |
|---|---|
| Лактоза, г | 80,5 |
| Фруктоза, г | 12,0 |
| Раффиноза пятиводная, г | 19,5 |
| Магний сернокислый, г | од |
| Глицерин, мл | 50,0 |
| Спермосан-3, тыс.ед. | 500-700 |
| Желток куриных яиц, мл | 200,0 |
| Вода дистиллированная, мл | 1000,0 |
При отсутствии сухих заготовок среды компоненты стерилизуют ультрафиолетовыми лучами в бактерицидной камере в течение 15-20 мин, отвешивают на аналитических весах и готовят среду, как указано выше.
Таблица 20
Степени разбавления спермы быков из расчета получения 10-12 млн. подвижных спермиев в дозе после замораживания в полипропиленовых соломинках (0,25 мл)
| Подвижность | Концентрация спермиев, млрд/мл | |||||||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| спермиев, баллов | 0,7 | 0,8 | 0,9 | 1,0 | 1,1 1 2 1,3 | 1,4 | 1,5 | 1,6 | 1,7 | 1,8 | 1,9 | 2,0 |
| 10 | 1:5 | 1:6 | 1:7 | 1:8 | 1:9 1:10 1:11 | 1:12 | 1:12 | 1:13 | 1:14 | 1:15 | 1:16 | 1:17 |
| 9 | 1:4 | 1:5 | 1:6 | 1:7 | 1:7 1:8 1:9 | 1:10 | 1:11 | 1:12 | 1:13 | 1:13 | 1:14 | 1:15 |
| 8 7 | 1:2 | 1:4 | 1:5 | 1:6 | 1:6 1:7 1:7 1:6 | 1:8 | 1:9 | 1:10 | 1:11 | 1:11 | 1:12 | 1:13 |
