Температуру среды перед разбавлением спермы (31 ±1 С) поддерживают в бактерицидной камере, термостате или в специальной водяной бане.
Сперму разбавляют в зависимости от подвижности и концентрации спермиев в эякуляте (табл. 20). Разбавляют сперму при температуре 31°+ 1C в мензурке. Для постепенного охлаждения разбавленную сперму помещают в стеклянный стакан с.водой температурой 31 +1°С и переносят в водяную баню с температурой воды 22 С на 20 минут.
Дальнейшая технологическая обработка спермы (расфасовка, закупорка и раскладка в штативы) проводится при комнатной температуре.
Расфасованную сперму помещают в холодильник при температуре 4°С и выдерживают 3-4 часа.
Разбавление спермы синтетическими средами для замораживания в облицованных гранулах. В качестве разбавителя для замораживания спермы в облицованные гранулы используют среды № 1 и 2.
| Таблица 21 Среда № 1 Компоненты | Норма |
|---|---|
| 11%-ный раствор лактозы или сахарозы, мл | 63,0 |
| Желток куриных яиц, мл | 30,0 |
| Глицерин, мл | 7,0 |
| Таблица 22 Среда № 2 | |
| Компоненты | Норма |
| Лактозы или сахарозы, г | 6,0 |
| Натрий лимоннокислый, трехзамещенный, пятиводный, г | 1,4 |
| Глицерин, мл | 5,0 |
| Вода дистиллированная, мл | 100,0 |
Процесс разбавления осуществляют придерживаясь рекомендаций, приведенных в таблице 23, с помощью технологической линии для расфасовки спермы быков в облицованные гранулы на автомате ПРЖ, позволяющий дозировано вводить среды в спермоприемник по закрытой системе без соприкосновения с окружающей средой.
Устройство состоит из эластичной полиэтиленовой емкости для разбавителя, соединенной эластичной трубкой с патрубками цилиндра-дозатора. Верхний конец дозатора герметически закрыт соразмерным его объему эластичным колпаком из полиэтиленовой пленки. Соединительная трубка по обе стороны от дозатора пережимается пружинными зажимами.
Емкость для разбавителя представляет собой пакет из полиэтиленовой пленки толщиной 120-150 микрон, к которому герметически подсоединен отрезок полиэтиленовой трубки диаметром 4-6 мм и длиной 20-25 мм. В качестве емкости может быть использован одноразовый спермоприемник.
Дозатор изготавливают из мерного цилиндра, в нижнюю часть которого вваривают два небольших стеклянных патрубка для соединения с трубками.
В качестве колпака используется пакет из полиэтиленовой пленки, который фиксируется резиновым кольцом на открытой цилиндрической части дозатора.
Перед работой емкость для разбавления стерилизуют ультрафиолетовым облучением, а дозатор с колпаком и соединительными трубками - пугем автоклавирования при 0,5 атмосфер в течение 30 минут. При этом свободные концы трубок заI крывают чехлами из пергаментной бумаги. Для разбавления используют два устройства, которые заполняют средами № 1 и 2. Устройство со средой № 1 размещают в термостате при температуре 35°С, устройство со средой № 2 используют в условиях комнатной температуры (18-22 С).
Таблица 23
Степени разбавления спермы быков из расчета получения 10-12 млн. подвижных спермиев в дозе после замораживания в облицованных гранулах (0,33 мл)
| Концентрация спермиев, млрд/мл | ||||||||||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| Подвижность спер миев, баллов | 0,7 | 0,8 | 0,9 | 1,0 | 1Д | 1,3 | 1,4 | 1Д | 1,6 | 1,7 | 1,8 | 1,9 | 2,0 | |
| 10 | U 0 | 1:12 | 1:14 | 1:16 | 1:18 | 1:18 | 1:20 | 1:20 | | 1:22 | 1:24 | 1:26 | 1:28 | 1:30 | 1:32 |
| 1:9 | 1:10 | 1:12 | 1:14 | 1:14 | 1:16 | 1:18 | 1:20 | 1:20 | 1:22 | 1:24 | 1:24 | 1:26 | 1:28 | |
| 1:8 | 1:8 | 1:10 | 1:12 | 1:12 | 1:14 | 1:16 | 1:16 | 1:18 | 1:20 | 1:22 | 1:22 | 1:24 | 1:26 | |
