Непосредственно после взятия сперму разбавляют средой № 1 в соотношении 1:1 и выдерживают при комнатной температуре (18-22 С) в течение 5-10 минут, до окончания оценки эякулята. Затем дополнительно ее разбавляют средой № 2, имеющей комнатную температуру, до требуемой концентрации спермиев в дозе.
Разбавление спермы синтетической средой для замораживания в форме гранул на фторопластовых пластинах. *Для разбавления применяют лактозо-желточную среду с глицерином. Разбавленную сперму охлаждают при 2-5°С в течение 3- 4 часов. После эквилибрации проверяют на подвижность спермиев, допуская к замораживанию сперму быков с оценкой не ниже 8 баллов, затем расфасовывают по 0,1 -02 мл на охлажденную пластину из полимерного материала (фторопласт).
4. Оттаивание и оценка замороженной спермы
Оттаивание и оценка замороженной спермы в соломинках. Оттаивание спермы в соломинках проводят в водяной бане при температуре 38 С в течение 10-11 с; соломинки помещают заводской пробкой вниз, а лабораторной вверх. За это время сперма достигает температуры О С и оценивается по общепринятой методике.
Оттаивание и оценка замороженной спермы в облицованных гранулах. Обойму с тубами, поднимают стержнемдержателем на уровень жидкого азота, открывают пробки и из каждого контейнера отбирают пинцетом с плоскими браншами по одной грануле, которые переносят в подогретую до 40 С воду на 8-10 секунд.
Поверхность пленочной оболочки гранулы с оттаянной спермой вытирают стерильной салфеткой, вскрывают ножницами и определяют подвижность под микроскопом. При герметизации спермодоз в оптически прозрачную трубку дозу вскрывают, а оценивают сперму под микроскопом через прозрачную стенку.
Оттаивание и оценка спермы в гранулах. Гранулы могут быть двух видов: объемом 0,5 мл, не требующие дополнительного разбавления, и концентрированные объемом 0,1-0,2 мл требующие дополнительного разбавления 2,9%-ным раствором лимоннокислого натрия.
Гранулы объемом 0,5 мл оттаивают следующим образом. Две гранулы по 0,5 мл (доза) кладут во флакон, предварительно помещенный в сосуд с теплой водой (40-45°С). Флакон с гранулами, не вынимая из воды, осторожно вращают круговыми движениями до растаивания гранул, после чего, вынимают из воды и ставят на стол при комнатной температуре 18-20°С. Время от- I таивания двух гранул - 1,5-2 минуты.
Гранулы объёмом 0,1 -0,2 мл оттаивают следующим образом. Одну гранулу 0,1 или 0,2 мл (доза) помещают во флакон или ампулу с 1 мл 2,9%-ного раствора лимоннокислого натрия, I предварительно подогретого до температуры 40-42°С. Флакон I или ампулу, не доставая из воды, осторожно покачивают до рас- I таивания гранул, после чего, сразу вынимают из воды и ставят j на стол при температуре 18-20°С.
Гранулы объемом 0,1-0,2 мл оттаивают за 5-8 секунд.
Категорически запрещается оттаивать гранулы при ком- I натной температуре.
Оттаянная сперма оценивается по общепринятой методике I Биологическое исследования замороженной спермы быков I проводят первый раз через 24 часа после замораживания, и вто- I рой раз - при передаче в стационарное хранилище (банк спер- I мы). Сперма находится на карантинном сроке 28 дней.*
-
Замороженная сперма быка должна соответствовать мини-1
-
мальным требованиям по ее качеству: подвижность спермиев - 1 3 балла, живых (эозинотрицательных) - 35%, выживаемость! спермиев не ниже 5 часов.
Активность оттаянной спермы (каждой гранулы в отдель?! ности) проверяют под микроскопом при-увеличении в 140-280 ] раз с использованием обогревательного столика Морозова или столика-термостата при температуре 40-42 С.
К использованию допускается сперма с активностью после оттаивания не ниже 0,3 балла (т.е. не менее 30% спермиев должны двигаться прямолинейно-поступательно).
После размораживания сперму надо использовать в течение 20-30 минут.
5. Хранение спермы
Хранение спермы вне организма имеет цель увеличить I срок выживаемости спермиев и их оплодотворяющей способности в замороженном или не замороженном состоянии, основан ! ного на снижении обменных процессов в сперме, при которых I они впадают в анабиоз (рис. 9,10).
;........... ......................... . ..................
Рисунок 9 - Закладка семени на карантинное хранение
