Staph.aureus
Strep.agalactiae
5
15 25
E.coli
20
35
E.coli, Staph.epid
ermidis, Strep.ag
alactiae
возбудителя не
выявлено
Рисунок 8 – Бактериологическое исследование проб молочного секрета вымени коров, больных маститом, %
Полученные нами данные свидетельствуют о том, что основная доля случаев приходится на маститы микробной этиологии. Его возбудителями являются Staph. аureus и Strep. Аgalactiaе (в нашем случае это 60 %). Полученные нами результаты исследований согласуются с данными К.Д. Валюшкина и P. Phuektes, которые указывают на высокую патогенность данных возбудителей, занимающих первое место в ранге распространения и причин, вызывающих заболевание молочной железы 31, 305 .
Это подтверждает то, что в этиологии мастита основную роль выполняют микроорганизмы, которые приводят к развитию воспаления в тканях молочной железы. Однако существуют мас-
титы, особенно субклинический, которые развиваются асептически при раздражении тканей вымени. Например, при неправильном машинном доении коров и способствующих паратипических факторах. Используемые лекарственные препараты и способы их введения не оказывают эффективного действия на микрофлору вымени вследствие специфического строения молочной железы, в результате чего острое воспаление переходит в хроническое.
В связи с этим возникает необходимость в ранней диагностике возбудителей воспаления молочной железы с помощью ДНК-тестов.
Идентификацию бактериальных патогенов рассматривают как окончательный диагноз мастита. Она также дает возможную информацию о профилактике и контроле этого заболевания. В большинстве клинических лабораторий методы тестирования основываются на микробиологическом анализе проб молока. Однако этот метод имеет ряд недостатков. Ограничивающим фактором является динамика инфекции. У коров с субклинической формой мастита степень инфицированности колеблется от низкой до высокой. В культуре молока с субклиническим маститом можно не выявить бактерии из-за очень небольшого количества патогенов или же остаточного присутствия антибиотиков, которые ингибируют рост бактерий in vitro. Идентификация видов бактерий стандартными бактериологическими методами требует более 48 часов. Метод ПЦР, разработанный для тестирования различных патогенов мастита, не имеет этих недостатков 305 .
Методы, используемые в эпидемиологических исследованиях, должны идентифицировать множество различных типов и должны быть недорогими, быстро и легко выполнимыми.
Для более точной постановки диагноза мастита у молочных коров использовали метод мультиплексной полимеразной цепной реакции, обеспечивающий параллельное выявление основных бактериальных агентов: Staph. aureus и Strep. аgalactiaе. Все олигонуклеотидные праймеры соответствовали опубликованным последовательностям (Forsman et al, 1997) [271].
Исходя из предварительного бактериологического анализа проб молока коров СПК «Ольговское» (таблица 33) провели
ПЦР. Для этого взяли 12 проб молока, инфицированного Staph. aureus и Strep. Agalactiaе, из отдельных долей вымени коров, больных маститом.
Оптимальная концентрация праймеров соответствовала количеству, необходимому для получения одновременной амплификации патогенов: Staph. aureus и Strep. аgalactiaе. Ни одна из пар праймеров не дала продуктов с ДНК от другого бактериального вида.
Из 12 проб молока выделили 5 проб - Staph. аureus, 7 проб - Strep. аgalactiaе, что на 100 % подтверждает данные, полученные при бактериологическом исследовании секрета вымени. Таблица 33 – Результаты мультиплексной ПЦР проб молока у коров, больных маститом
| Вид возбудителя | Количество проб |
|---|---|
| Staph. аureus | 5 |
| Strep. agalactiaе | 7 |
| ИТОГО | 12 |
Видоспецифическая ПЦР была разработана нами для двух основных возбудителей мастита: Staph. аureus и Strep. аgalactiaе. Мультикомплексная ПЦР позволяет одновременно обнаружить множественные патогены в одной реакции. При этом используется небольшое количество реактивов, по сравнению с бактериологическим анализом молока, экономится время, что облегчает применение мультикомплексная ПЦР для диагностики мастита.
Проведенные исследования свидетельствуют о целесообразности использования данных маркеров в качестве тест-систем для идентификации основных возбудителей мастита: Staph. aureus и Strep. аgalactiaе.
