2. Материалы и методы исследований

Экспериментальная часть работы выполнялась в 20062011 гг. в УО «Гродненский государственный аграрный университет» и УО «Витебская ордена «Знак почета» государственная академия ветеринарной медицины». ДНК-тестирование животных по генам CSN3 проводили в РУП «Научно-практический центр НАН Беларуси по животноводству», а ДНК-диагностику возбудителей мастита – в ГНУ «Институт биоорганической химии» НАН Беларуси.

Полиморфизм гена каппа-казеина изучен в популяции 72 быков-производителей, принадлежащих Щучинскому филиалу РУСП «Гродненское племпредприятите» (50 производителей черно-пестрой породы белорусской селекции, 13 производителей голштинской породы шведской селекции и 9 производителей голштинской породы венгерской селекции); 20 быков РСУП «Минскплемпредприятие»; 160 – РСУП «Брестплемпредприятие»; 83 – РСУП «Витебскплемпредприятие»; 71 – РСУП «Гомельплемпредприятие»; 94 – РСУП «Могилевплемпредприятие» и 232 ремонтных бычков РУСХП «Оршанское племпредприятие». Также было протестировано 68 коров красной белорусской породной группы и 80 коров белорусской черно-пестрой породы в ЧСУП «Новый Двор – Агро» Свислочского района Гродненской области (средний уровень продуктивности), 81 высокопродуктивная корова белорусской черно-пестрой породы с удоем не ниже 7500 кг, принадлежащих СПК «Обухово» Гродненского района Гродненской области и 380 коров в СПК «Ольговское» Витебского района Витебской области.

Ядерную ДНК выделяли из разбавленной спермы (пайеты) и ткани (ухо) перхлоратным методом. Основные растворы для выделения ДНК, амплификации и рестрикции готовили по Т. Маниатису, Э. Фрич, Дж. Сэмбруку [135].

Для проведения полимеразной цепной реакции (ПЦР) использовали олигонуклеотидные праймеры:

CAS1: 5′ - ATA GCC AAA TAT ATC CCA ATT CAG T - 3′ CAS2: 5′ - TTT ATT AAT AAG TCC ATG AAT CTT G -3′.

Концентрацию ДНК, специфичность амплификата и результаты рестрикции оценивали электрофоретическим методом в агарозном геле, окрашенном бромистым этидием, с помощью трансиллюминатора в проходящем УФ-свете с длиной волны 260 нм. В качестве маркера использовали ДНК плазмиды pBR322, расщепленную рестриктазой AluI. По 10 мкл амплификата расщепляли рестриктазой HindIII при температуре 37ºС в течение 4-х часов. Продукты рестрикции разделяли электрофоретически в 4% агарозном геле при напряжении 100 вольт, в течение 1 часа. Для анализа распределения рестрикционных фрагментов ДНК в агарозном геле после электрофореза использовали компьютерную видеосистему и программу VITran [313] (рисунок 1).

1 2 3 4 5

Рисунок 1 – Рестрикция амплификатов (№ 1-5), полученных с помощью лизиса, проведенного в течение 8-10 часов с использованием рестриктазы HindIII. Электрофорез проводили в 2% агарозном геле, 30 мин, 130 В

Дорожки 1, 4, 5 – генотип CSN3^АА – фрагмент 530 п.о. Дорожка 3 – генотип CSN3^АВ – фрагменты 530, 400 и 130 п.о. Дорожка 2 – генотип CSN3^ВВ – фрагменты 400 и 130 п.о.

Для изучения молочной продуктивности подопытные коровы белорусской черно-пестрой породы были сгруппированы в зависимости от возраста: первотелки, коровы второго и третьего отелов. Молочную продуктивность коров красной белорусской породной группы изучали только по полновозрастной лактации. В обработку включали показатели по тем животным, у которых продолжительность лактации была не меньше 240 дней, а возраст при первом отеле составлял 25-30 месяцев. В каждом хозяйстве у животных учитывали удой, содержание жира и белка, выход молочного жира и белка за 305 дней лактации. Молочную

продуктивность подопытных коров определяли при помощи проведения ежемесячных контрольных доений.

Перед тем, как отобрать молоко для исследования его технологических свойств, мы провели биохимическое исследование крови подопытных животных в лаборатории УО «ГГАУ». При этом определяли содержание общего белка (в том числе альбуминов), эритроцитов, лейкоцитов, кальция, фосфора и гемоглобина. Пробы крови для анализа брали из яремной вены у 43 животных (в ЧСУП «Новый Двор – Агро» 16 коров красной белорусской породной группы и 12 коров белорусской чернопестрой породы; в СПК «Обухово» 15 высокопродуктивных коров белорусской черно-пестрой породы) утром до кормления. Гематологические показатели определяли в соответствии с «Методическими указаниями по применению унифицированных биохимических методов исследований крови, мочи и молока в ветеринарных лабораториях» [145].

Кислотность молока (ºТ) определяли арбитражным методом по П.В. Кугеневу, Н.В. Барабанщикову [124], плотность молока, г/см³ – ареометром в молочном цехе СПК «Агро-Лозы» Волковысского района Гродненской области. Показатели качества молока коров (содержание сухого вещества, %; белка, %; жира, %; лактозы, %; количество соматических клеток, тыс./мл) определяли в Гродненской молочной лаборатории РУСП «Гродненское племпредприятие» методом проточной цитометрии при помощи прибора «Комбископ». Процентное содержание сухого обезжиренного остатка (СОМО) вычисляли по формуле:

СОМО = С – Ж , (2.1)

где: СОМО – сухой обезжиренный молочный остаток, %; С – сухое вещество молока, %; Ж – содержание жира, %.

Для изучения технологических свойств молока были сформированы опытные группы коров, согласно идентифицированным генотипам каппа-казеина.

Опытные образцы твердого сыра из молока коров с различными генотипами каппа-казеина были приготовлены в мо-