Концентрацию ДНК, специфичность амплификата и результаты рестрикции оценивали электрофоретическим методом в агарозном геле, окрашенном бромистым этидием, с помощью трансиллюминатора в проходящем УФ-свете с длиной волны 260 нм. В качестве маркера использовали ДНК плазмиды pBR322, расщепленную рестриктазой AluI. По 10 мкл амплификата расщепляли рестриктазой HindIII при температуре 37ºС в течение 4-х часов. Продукты рестрикции разделяли электрофоретически в 4% агарозном геле при напряжении 100 вольт, в течение 1 часа. Для анализа распределения рестрикционных фрагментов ДНК в агарозном геле после электрофореза использовали компьютерную видеосистему и программу VITran [313] (рисунок 1).
1 2 3 4 5
Рисунок 1 – Рестрикция амплификатов (№ 1-5), полученных с помощью лизиса, проведенного в течение 8-10 часов с использованием рестриктазы HindIII. Электрофорез проводили в 2% агарозном геле, 30 мин, 130 В
Дорожки 1, 4, 5 – генотип CSN3АА – фрагмент 530 п.о. Дорожка 3 – генотип CSN3АВ – фрагменты 530, 400 и 130 п.о. Дорожка 2 – генотип CSN3ВВ – фрагменты 400 и 130 п.о.
Для изучения молочной продуктивности подопытные коровы белорусской черно-пестрой породы были сгруппированы в зависимости от возраста: первотелки, коровы второго и третьего отелов. Молочную продуктивность коров красной белорусской породной группы изучали только по полновозрастной лактации. В обработку включали показатели по тем животным, у которых продолжительность лактации была не меньше 240 дней, а возраст при первом отеле составлял 25-30 месяцев. В каждом хозяйстве у животных учитывали удой, содержание жира и белка, выход молочного жира и белка за 305 дней лактации. Молочную
продуктивность подопытных коров определяли при помощи проведения ежемесячных контрольных доений.
Перед тем, как отобрать молоко для исследования его технологических свойств, мы провели биохимическое исследование крови подопытных животных в лаборатории УО «ГГАУ». При этом определяли содержание общего белка (в том числе альбуминов), эритроцитов, лейкоцитов, кальция, фосфора и гемоглобина. Пробы крови для анализа брали из яремной вены у 43 животных (в ЧСУП «Новый Двор – Агро» 16 коров красной белорусской породной группы и 12 коров белорусской чернопестрой породы; в СПК «Обухово» 15 высокопродуктивных коров белорусской черно-пестрой породы) утром до кормления. Гематологические показатели определяли в соответствии с «Методическими указаниями по применению унифицированных биохимических методов исследований крови, мочи и молока в ветеринарных лабораториях» [145].
Кислотность молока (ºТ) определяли арбитражным методом по П.В. Кугеневу, Н.В. Барабанщикову [124], плотность молока, г/см3 – ареометром в молочном цехе СПК «Агро-Лозы» Волковысского района Гродненской области. Показатели качества молока коров (содержание сухого вещества, %; белка, %; жира, %; лактозы, %; количество соматических клеток, тыс./мл) определяли в Гродненской молочной лаборатории РУСП «Гродненское племпредприятие» методом проточной цитометрии при помощи прибора «Комбископ». Процентное содержание сухого обезжиренного остатка (СОМО) вычисляли по формуле:
СОМО = С – Ж , (2.1)
где: СОМО – сухой обезжиренный молочный остаток, %; С – сухое вещество молока, %; Ж – содержание жира, %.
Для изучения технологических свойств молока были сформированы опытные группы коров, согласно идентифицированным генотипам каппа-казеина.
Опытные образцы твердого сыра из молока коров с различными генотипами каппа-казеина были приготовлены в мо-
лочном цехе СПК «Агро-Лозы» Волковысского района Гродненской области по следующей технологии. По 10 кг молока, полученного от животных каждой генотипической группы по гену CSN3АА , CSN3АВ , CSN3ВВ заливали в ушат и пастеризовали 20 минут при температуре 65 ºС, а затем сразу же охлаждали до 32 – 34 ºС. Молоко перемещали в сыродельную ванну и вносили 40 %-ный раствор хлористого кальция из расчета 1,2 – 1,5 г на 10 кг и закваску из чистых культур молочнокислых бактерий в количестве до 1 %. 2 г сычужного порошка и 2 г поваренной соли растворяли в 0,25 л воды, подогретой до температуры 30 – 32 ºС. Через 10 минут определяли крепость раствора. Для этого из молока, находящегося в ванне, отбирали 100 мл, в которые добавляли пипеткой 10 мл сычужного раствора. Содержимое быстро перемешивали и определяли продолжительность образования сгустка. Время с момента внесения раствора до появления сгустка характеризует крепость сычужного раствора, выраженную в секундах. Потребность в сычужном растворе для всего перерабатываемого молока определяли по формуле:
М К 0,1
Р
, (2.2)
В 60
где: Р – количество сычужного раствора, л; М – количество молока, л; К – крепость сычужного раствора, с; В – заданное время свертывания молока, мин.
Сычужный раствор вливали в ванну тонкой струей при постоянном перемешивании. После этого молоко оставляли в покое для свертывания. Одновременно с этим отмечали время свертывания молока. Образовавшийся сгусток разрезали ножом до получения кубиков. В таком состоянии сырная масса оставалась в покое 5 минут. Затем сырную массу измельчали до образования зерен размером 4-6 мм. После измельчения сырное зерно оставалось в покое 3 минуты. Далее через сито удаляли сыворотку. Часть изъятой сыворотки использовали для второго нагревания сырного зерна до 40 ºС. Сыворотку, нагретую до 50 ºС,
