та. При этом диагностировали клинически выраженный мастит и субклинический. Клиническое исследование животных включало осмотр вымени, пальпацию молочной железы, пробное сдаивание и отбор молока для лабораторного исследования. Осмотром определяли форму вымени, симметричность и развитость долей вымени, целостность молочной железы. При пальпации обращали внимание на температуру, болезненность, консистенцию тканей вымени. По наличию примесей в секрете молочной железы и характеру клинических признаков диагностировали клинически выраженный мастит. Если секрет вымени не отличался от нормального молока, то для определения субклинического мастита использовали диагностикум бромтимоловый синий и прибор мастит-тест. Постановку реакции осуществляли следующим образом: в лунку молочно-контрольной пластинки (после доения) вносили 1 мл исследуемого молока и добавляли 1 мл реактива, содержимое перемешивали. При положительной реакции наблюдали окрашивание молока в зеленый, при отрицательной реакции - в салатовый или светло-зеленый цвет.
В осенне-зимний период времени коровы содержались в основных помещениях на привязи, в стойлах, на полах из полой керамической плитки. В качестве подстилки использовали древесные опилки. Доение коров производили на доильной установке АДМ-8.
Морфофункциональные свойства вымени коров изучали согласно методическим материалам «Оценка вымени и молокоотдачи коров молочных и молочно-мясных пород» 158 .
Форму вымени коров определяли в период раздоя с 30 по 90 день. Длину сосков измеряли сантиметровой лентой с делением 1мм от основания до кончика соска, диаметр – в средней части соска, кутиметром перед доением. Скорость молокоотдачи у 227 коров определяли путем деления количества молока в разовом удое на продолжительность доения. Разовый удой (кг) и время доения коров (мин) определяли во время проведения контрольной дойки.
Возраст коров, удой за предыдущую лактацию учитывали по данным зоотехнического учета хозяйства.
Исследования крови проводили в центральной научноисследовательской лаборатории УО «Витебская государственная
академия ветеринарной медицины». Для изучения морфологического состава пробы крови брали из яремной вены с соблюдением правил асептики [107]. Для определения количества лейкоцитов, эритроцитов, гемоглобина кровь стабилизировали раствором гепарина.
В крови определяли количество эритроцитов и лейкоцитов, концентрацию гемоглобина, гематокрита – на гематологическом анализаторе Medonic СА – 620.
Биохимические исследования сыворотки крови включали:
- определение общего белка – рефрактометрическим мето-
дом,
-
общего кальция – фотометрическим методом,
-
неорганического фосфора - по Полсу в модификации
-
В.Ф. Коромыслова и Л.А. Кудрявцевой,
-
глюкозы – глюкозооксидантным методом,
-
щелочного резерва – диффузионным методом по И.П.
-
Кондрахину.
Для обнаружения микроорганизмов из пораженных долей брали секрет вымени коров, реагирующих на диагностикум бромтимоловый синий.
Проведены исследования по изучению ассоциации полиморфных вариантов гена CSN3 с частотой заболеваемости коров маститами.
Использовали ПЦР для диагностики возбудителей золотистого стафилококка.
ДНК выделяли из молока больных маститом животных с использованием наборов, изготовленных в институте биоорганической химии (реагент А и реагент В).
Для более точной постановки диагноза мастита у молочных коров был применен метод мультиплексной полимеразной цепной реакции, который позволил параллельно выявить двух основных бактериальных агенотов, вызывающих мастит у коров: S. аureus, S. аgalactiae.
При проведении мультиплексной ПЦР использовали праймеры, нуклеотидные последовательности которых соответствовали последовательностям, предложенным Forsman, al., 1997:
S. aureus: TCTTCAGAAGATGCCGAATA TAAGTCAAACGTTAACATACG
S. agalactiae: AAGGAAACCTGCCATTTG
TTAACCTAGTTTCTTTAAAACTAGAA
Для проведения ПЦР S. аureus и S. аgalactiae использовали реакционную смесь в объеме 50 мкл: 200 мкМ dATP , 10 мм буфер для проведения ПЦР (рН = 8,3), 50 мМ КCL и 200 нг экстрагированной ДНК.
ПЦР – программа: «горячий старт» – 95о С – 5мин; 36 циклов: денатурация – 95о С – 1мин, отжиг – 59о С – 30 сек, синтез – 72о С – 30 сек; элонгация –72о С – 7 мин.
Продукты расщепления амплификата рестриктазой HаеIII представлены на рисунке 2.
Различий в уровне кормления и условиях содержания животных за учетный период в хозяйстве не наблюдалось.
Средняя арифметическая для качественных признаков отражает процент, или долю, особей, имеющих данный признак. В этом случае совокупность состоит из двух групп. Численность первой группы (р1), численность второй – (р2).
Долю животных, имеющих изучаемый признак (р), определяют по формуле:
