a ee eeneee ae aa:
Е р OO OH
: PTS Mae Nee: Po Sere | ae
Е ie ae Ge i] ie
и 1 : м | ifs
Piles
SIR a ae fa Ry Е и
о ем. я р. в
а aoe ol Gee
о = не ие | |. on is
а ree us 3
р геА Baeey fee a. ee |
ie oa. Se. OY |
о : м> в -
м г ш и
| im | ‘=i ам о м
ar | eo __ af ae se ae
| See) о вый he Bae бе |
Pee | ee | Вере | te oo)
Г июнь ^^ ЗА ВЛЕВО ое В
Рис. 6. Автоматический апалиРис. т. И ПИР затор аминокислот Hd-—-1200E. затор и
диняют нонообменные группы ЗО3Н. В воде смолы силь но набухают, образуя гелеподобную массу. Когда DO: пускается гидролизат изучамого белкового вещества через колонку, заполненную понпообменной смолой, аминокислоты распределяются в соответствии с их Rj между водной фазой и фазой теля. Элювнруют аминокислоты буферными растворами при определелных рН. и Указанный метод, разработанный Муром и Стейном, позволил сконструировать для определения аминокислот специальные автоматические аминокислотные анализаторы типа KJIA-3 японской фирмы «Хитачи»: «Унихром» — американской; Hd=1200 Е чехословацкой и На автоматическом апализаторе пробу аминокислот вводят в верхнюю часть колонки анализатора вручную или с помощью автоматических заборников проб и элтои-
25
x <
x 8 s |
вс Е
SS 3 =
Е 3
а Ssа
А S
м |
=SI
=
5
Ss к |
з aS
Sy $ 55
SS Ss ЗЕ = NS =
В ЗЕ358558 535 FS85 85 = SSS35: 5533 |
Са Ss § а ЗЕ
SS за aS
7 |
A Puc.= ЕВ 8, ХроматограммыB= инеяausowicnor:в came . ©
руют буферный раствор для кислых аминокислот при pH-3,25, для нейтральных — 4,25, для основных — 58 которые нагнетаются насосами со скоростью 30 мл/час. После разделения в колонках амннокислоты выходят вместе с буферным раствором в определенной последовательпости, попадают в смесительную камеру, где смешиваются с раствором нингидрина, подаваемого нингидриновым насосом со скоростью 15 мл/час. Смесь посту-
26
пает в реакциоиную баню, где при 100°C полностью проявляется окраска. Окрашенная смесь проходит через фотометр, фотоэлемепты регистрируют ее концентрацию, и данные фиксируются пишущим устройством в виде пиков на ленте бумаги (рис. 8). Все остальные операции — подготовка образца к гидролизу, гидролиз и подготовка гидролизата к анализу — осуществляются аналогичным образом, описанным выше. Ферментативные методы основаны на ферментативHOM декарбоксилировании, то есть аминокислота определяется по специфическому действию на ее ферменты. Определяются этим методом аргинин, гистидин, лизин, глутаминовая кислота. ‚Количество аминокислоты определяется по выделенной углекислоте или по количеству образовавшегося амина по принципу
reNH, NH, he р = МН a= | Декарбоксилаза | (СН м +-с0, CHNH, (CHa) COOH CH»NH,| Аргинии Агглютин Декарбоксилазы обладают строгойр стереотипностью, поэтому они используются для определения Г.-изомера в препаратах ОГ-аминокислот, но труднссть подготовки специфического фермента ограничивает возможности широкого применения этого метода. Микробиологический метод. Ценность его состоит в том,меняетсячто дляон длянегоопределенияне требуетсябольшогогидролизачислаобразца,аминокиспри - лот, отличается высокой точностью. Сущность метода в том, что определяемая аминокислота лимитирует рост ООО В ПО тю CPPS GHPEMGIEENEN He) EET TEASE «я [Nee Эрот и оСтетомио а УЕ США, ГДР и дру nye) tana OF SPHUEETEHO принят дя опреде аминокислот в кормах»и продуктах. Отдельные микро Ваза а . 9. дик OE
2
