-
Камеру разбирают до гелевых пластинок.
-
При необходимости удаляют лишние участки геля (ячейки и т.п.)
-
Отмечают начало геля, отрезая уголок гелевой пластинки со стороны начала нанесения проб. Когда гель находится вне камеры, легко перепутать начало геля, поэтому возможен другой способ. В последнюю ячейку не наносить образец — в этом случае пустая дорожка на геле будет маркировать конец нанесения проб.
-
Г елевую пластинку переносят в кювету с раствором красителя.
-
Г елевые пластинки помещают в раствор Кумасси на ночь для окрашивания.
-
На следующее утро краску сливают.
-
Г елевые пластинки промывают дистиллированной водой и заливают смесью для отмывки.
-
Смесь для отмывки меняют несколько раз.
-
Идентифицирование генотипов (чтение фореграмм) проводят на хорошо отмытых от фона пластинках геля над лампой искусственного освещения, закрытой матовым фильтром.
-
Результаты вносят в рабочий журнал и выходные документы. Для избежания ошибок или выяснения их причин необходимо рабочий журнал вести с особой тщательностью, отражая в записях постановки методики не только все непредвиденные изменения, но и реальную информацию о режиме проведения электрофореза (напряжение, время), концентрации гелей, pH буферов, титры и количества нанесения образцов и другое, а также в рабочем журнале должен быть отражен календарь приготовления растворов и фирмы-изготовители реактивов.
2.4. Определение генотипов животных по полиморфным белкам
Трансферрин у крупного рогатого скота представлен четырьмя аллелями. На гелевой пластинке (фореграмме) аллели расположены по мере снижения электрофоретической подвижности в следующем порядке: Tf A, Tf Db Tf D2, Tf E (у аллеля Tf А максимальная скорость миграции). Г омозиготы имеют по три полосы, гетерозиготы представляют собой совмещенную картину гомозиготных составляющих (рис. 1 ).
________AD? AA D 1 D 1 ADi D 1 D 7 AE D?E ________
Puc. 1. Спектр генотипов трансферрина у крупного рогатого скота
аллелями: Ptf А Посттрансферрин у крупного рогатого скота представлен двумя 一 быстромигрирующий, Ptf В 一 медленномигрирующий. Г омозиготы (рис. 2) имеют по две полосы, гетерозиготы — три (одна из полос разных гомозигот совпадает по подвижности).
AA ВВ АВ ВВ АВ АВ AA ВВ
Рис. 2. Спектр генотипов посттрансферрина крупного рогатого скота
Постальбумин у крупного рогатого скота представлен двумя аллелями: Pta А — быстромигрирующий, Pta В — медленномигрирующий. Гомозиготы (рис. 3) имеют по одной полосе, гетерозиготы — две.
АА ВВ АВ ВВ АВ АВ АА ВВ
Рис. 3. Спектр генотипов постальбумина крупного рогатого скота
2.5. Необходимое оборудование
-
Автоматические пипетки.
-
Весы на 0,5-1 кг.
-
Весы торсионные на 500 мг.
-
Вытяжной шкаф.
- Дистиллятор.
6 . Источник питания.
- Камеры для вертикального электрофореза.
8 . Лабораторная посуда.
-
Магнитные мешалки.
-
Морозильная камера.
-
рН-метр.
-
Термостат.
-
Холодильник.
3. Выявление генетических аномалий у крупного
рогатого скота глазомерно-аналитическим методом
Под термином «генетические аномалии» следует понимать любое отклонение от норм в геноме и генотипе животного, создающее реальную угрозу для жизни, вызывающее предрасположенность к опасным заболеваниям, предопределяющих потерю способности к воспроизводству и снижение продуктивных качеств как самого пробанда, так и его потомков.
Генетические аномалии — это морфофункциональные нарушения в организме животных, возникающие в результате генных и хромосомных мутаций.
«Генетическая аномалия представляет собой наследственно обусловленное, нежелательное с точки зрения здоровья популяции и племенного использования, отклонение от типичного (от нормы), в возникновении которого определенную роль сыграл генотип животного» (Майер, 1967).
Породные и семейные аномалии обусловлены тем, что они сцеплены с хозяйственно-полезными признаками данной породы или родственной группы животных. Их частота увеличивается при отборе животных по селекционируемому признаку.
Г енетические аномалии у крупного рогатого скота выявляются следующими методами: глазомерно-аналитическим, цитогенетическим, методами ДНК-диагностики.
Глазомерно-аналитический метод позволяет обнаружить аномалии на основе морфо-функциональных изменений в организме животных, выявляемых при глазомерной оценке (табл. 2 ).
