роцитов крови. Комплемент содержится в нормальной сыворотке крови животных.
В реакции гемолиза при определении антигенов крови крупного рогатого скота используют кроличий комплемент.
Техника приготовления кроличьего комплемента
- Кровь у кроликов можно брать двумя способами:
а) непосредственно из сердца — (кролика фиксируют на спине, вводят в ушную вену 1 мл теопентала, животное через 1 - 2 мин засыпает); из сердца длинной иглой берут 40-50 мл крови.
б) из ушной вены — (смазывают край уха ксилолом или толуолом, делают продольный разрез ушной вены размером 3 - 5 мм, кровь собирают в чашку Петри).
-
Кровь выдерживают при комнатной температуре 1,5-2 ч до свертывания и выделения сыворотки.
-
Отстоявшуюся сыворотку сливают в центрифужные стаканы и центрифугируют при 3000-3500 мин" 1 — 10 мин.
-
Сыворотку рекомендуется абсорбировать эритроцитами крупного рогатого скота, так как у некоторых кроликов встречаются естественные антитела типа гемолизинов.
-
Готовую сыворотку расфасовывают во флаконы по 10-20 мл.
Для повышения качества и активности комплемент готовят путем смешивания сывороток крови, полученных в один и тот же день от 1 0 и более кроликов.
ТУ на комплемент
-
Хранят комплемент при температуре -20°С до 6 месяцев.
-
Комплемент, сохранявшийся более 6 месяцев, используют после усиления его активности путем смешивания в различных соотношениях (1:1, 1:2, 1:3 и 1:4) со свежеполученным. Соотношение зависит от истинной активности хранившегося и свежеполученного комплемента.
-
Активность комплемента проверяют первый раз после трехмесячного хранения путем постановки реакции гемолиза с 1 0 - 2 0 образцами крови.
Консерванты крови
Образцы крови для определения эритроцитарных антигенов необходимо консервировать антикоагуляционным растворам (антикоагулянтом).
| Прописи антииоагулянтов | ||
|---|---|---|
| I. | Лимоннокислый натрий трехзамещенный | 32.0 г |
| Глюкоза | 1 0 . 0 г | |
| Альбуцид | 5.0 г | |
| Риванол | 0,04 г | |
| Дистиллированная вода | до 1 0 0 0 мл | |
| II. | Цитрат натрия | 38.0 г |
| Лимонная кислота | 3,6 г | |
| Глюкоза | 37.0 г | |
| Стрептомицин безводный | 2,4 г | |
| Дистиллированная вода | ДО 1 0 0 0 мл | |
| III. | Цитрат натрия | 32.0 г |
| Глюкоза | 1 0 . 0 г | |
|---|---|---|
| Алестен (сульфоацетамид) | 5.0 г | |
| Риванол | 0,04 г | |
| Дистиллированная вода | до 1 0 0 0 мл | |
| (можно довести pH раствора до 5,6 с помо | ||
| щью 1 0 %-ной лимонной кислоты) | ||
| IV. | Трехзамещенный лимоннокислый натрий | 50.0 г |
| Глюкоза | 1 0 . 0 г | |
|---|---|---|
| Стрептомицин | 1 . 0 г | |
| Дистиллированная вода | до 1 0 0 0 мл |
Техника приготовления антикоагуляционных растворов
На аналитических весах делают навески всех ингредиентов.
В мерную колбу на 1000 мл вносят: навески лимоннокислого натрия и глюкозы, 300-400 мл кипяченой дистиллированной воды, температуру раствора доводят до температуры 36-37°С, вносят навески альбуцида и риванола, доводят объем раствора до метки 1000 мл дистиллированной водой при температуре 36-37°С, смесь перемешивают и фильтруют через ватно-бумажный фильтр.
Раствор хранится в холодильнике при температуре 4°С в течение 1-1,5 месяцев.
Реактивы
1 . Глюкоза кристаллическая гидратная ГОСТ 975-75 2. Хлористый натрий по 0,9 г в таблетках ГОСТ 4233-77 3. Лимоннокислый натрий трехзамещенГОСТ 22280-76 ный 4. Риванол (этакридин лактат) ГФ, X СТ27 5. Альбуцид (сульфацил натрия) ГФ, X СТ641 6 . Левомицетин ГФ, X СТ371 7. Спирт ректификат 8 . Кислота серная техническая удельным 1,82-1,84 весом 9. Двуххромовокислый калий (К 2 СЮ 7) ГОСТ 4220-75 10. Сода кальцинированная ГОСТ 83-79
1.2. Правила получения и хранения образцов крови
Пробы крови для генетической экспертизы у крупного рогатого скота берут из яремной вены по общепринятой методике специалисты ветеринарной службы хозяйства в присутствии зоотехникаселекционера.
Получение образцов крови
Образцы крови берут в стерильные пробирки.
Перед взятием крови пробирки номеруют и вносят в них по 3-6 мл антикоагулянта и расставляют в штатив;
осторожно по стенке пробирки приливают кровь в объеме 1 - 2 мл (соотношение антикоагулянта и крови 3:1);
пробирку закрывают пробкой и несколько раз переворачивают для перемешивания содержимого;
в ведомость взятия крови сразу записывают индивидуальный номер животного, у которого взята кровь.
Доставка и хранение образцов крови
Образцы крови помещают в сумку-холодильник или термос при температуре 2-4°С и направляют в лабораторию в течение 1-2 суток со дня взятия крови.
