зволять достоверно идентифицировать самые маленькие хромосомы набора.

При первоначальном анализе (используется рутинная окраска по Романовскому-Гимза) в 30-40 метафазных пластинках, визуально подсчитывают число хромосом. На этом этапе подсчитывают модальное число хромосом, определяют маркерные хромосомы и генетический пол животного по составу половых хромосом. Затем фотографируют несколько типичных метафазных пластинок. На микрофотографиях проводят анализ кариотипа и подтверждают данные первоначального визуального анализа. В случае, если возникает подозрение на присутствие конституциональных аномалий или значительных спонтанных изменений кариотипа, фотографируют от 30 до 50 метафазных пластинок.

Микрофотографирование препаратов хромосом

Микрофотографирование проводят на фотопленку микрат Орто (микрат 200) или микрат 300 (в зависимости от применяемой окраски хромосом). Для проявления фотопленок и печати фотографий используют стандартные проявители и закрепители.

На основании визуального анализа дают следующие характеристики животного: модальное число хромосом; генетический пол; наличие или отсутствие конституциональных нарушений кариотипа (транслокаций, центрических слияний, делеций и инверсий хромосом); частоту гипо- и гиперплоидных клеток; частоту полиплоидных клеток; частоту клеток со спонтанными структурными аберрациями хромосом.

Эти характеристики позволяют с высокой степенью точности оценить генетическое состояние животного, наличие или отсутствие у него генетического груза и племенной ценности.

При наличии у животного конституциональных аномалий хромосом, а также при высоком уровне спонтанных нарушений кариотипа используют дифференциальное окрашивание хромосом и проводят кариотипический анализ на 30-40 микрофотографиях для каждого животного.

Кариотипический анализ

Кариотипический анализ позволяет точно идентифицировать каждую хромосому набора, определить гомологичные хромосомы 44

и пронумеровать хромосомы, согласно стандартной номенклатуре кариотипа.

В зависимости от предполагаемого типа аномалии хромосом выбирают один из предложенных типов дифференциального окрашивания. Если предполагаются нарушения дистальных участков хромосом, то необходимо использовать дифференциальную окраску R-типа.

При кариотипическом анализе используют карты дифференциально исчерченных хромосом стандартного кариотипа. Дифференциальный рисунок каждой хромосомы исследуемого животного сопоставляют со стандартным рисунком, находят гомологичные хромосомы и присваивают каждой паре хромосом порядковый номер.

Кариотипический анализ позволяет точно определить у каждого животного: модальное число хромосом; генетический пол; наличие или отсутствие хромосомных аберраций; номер и участок хромосомы, с точностью до одного диска, затронутой обнаруженной аберрацией; частоту гипо- и гиперплоидных клеток; номера утраченных или дополнительных хромосом в клетке; частоту клеток со спонтанными структурными аберрациями хромосом; номер хромосомы со структурной аберрацией и точное местоположение измененного участка хромосомы.

5.4. Описание хромосомного набора крупного рогатого скота

Кариотип крупного рогатого скота состоит из 60 хромосом, 29 пар аутосом и половые хромосомы — 2n=60, X Y. Все аутосомы данного кариотипа представлены акроцентрическими хромосомами, постепенно убывающих в размерах. Поэтому идентификация отдельных аутосом крупного рогатого скота при рутинной окраске невозможна, для идентификации хромосом применяют дифференциальную окраску. X хромосома — крупный субметацентрик, у- хромосома — самая маленькая хромосома — субметацентрик. Эти хромосомы возможно идентифицировать при рутинной окраске. При рутинной окраске возможно идентифицировать только половые хромосомы: Х-хромосому — крупный субметацентрик и у- хромосому — самая маленькая хромосома набора. Идентификация отдельных аутосом крупного рогатого скота при рутинной окраске

невозможна. Для идентификации всех хромосом набора применяют дифференциальную окраску.

Для идентификации каждой дифференциально исчерченной хромосомы используют карты стандартного кариотипа, издаваемые Международной конференцией по стандартизации кариотипов животных.

5.5. Необходимое оборудование

1 .Одноразовые стерильные шприцы и иглы.

1. Центрифуга.

2. Стерильный культуральный бокс или настольный ламинарный бокс.

3. Термостат.

4. Холодильник.

6 . Малое лабораторное оборудование (водоструйный насос, вортекс, вариационные пипетки, пинцеты, контейнеры для окрашивания препаратов, стерилизаторы, медицинские шприцы типа «Рекорд» на 20-10-5 мл, инъекционные и специальные медицинские иглы, одноразовые шприцы и иглы, маркеры для химической посуды, парафильм).

1. Лабораторные аналитические весы.

8 . Лабораторный аналитический микроскоп.

1. Дистиллятор.

2. Лабораторная посуда ( колбы вместимостью 100-500 мл, химические стаканы 50-800 мл, мерные цилиндры 10-100 мл, пробирки, чашки Петри).

11 • Предметные стекла.

1. Покровные стекла.

2. Фотооборудование (фотоувеличитель, красный фонарь, бачки для проявления фотопленки, кюветы для печатания фотоснимков, аппарат для сушки фотоснимков).