щен в сосуд до дна. Если азот заливают с другого сосуда Дьюара, то заливка должна производиться через широкую металлическую воронку, мелкими порциями, с паузами в 5-6 секунд. Во время заливки категорически запрещается заглядывать в горловину сосуда. Для определения высоты уровня жидкости в сосуде следует пользоваться металлической или деревянной рейкой.
Сосуд Дьюара, заполненный жидким азотом, в котором хранится сперма в гранулах, расфасованная в марлевые мешочки или металлические канистры, должен быть всегда закрыт только специальной пробкой. После изъятия гранулы из мешочка или из канистры сосуд немедленно закрывают пробкой.
В процессе работы с замороженным семенем необходимо своевременно доливать азот и не допускать снижение уровня его ниже 1/3 емкости сосуда. Мешочки или канистры с гранулами семени должны всегда находиться в жидком азоте.
Не допускается эксплуатация сосуда Дьюара, у которого верхняя часть горловины обрастает льдом.
Категорически запрещается оставлять на отогрев сосуды Дьюара, потерявшие вакуум (покрывшиеся слоем снега в верхней части кожуха), в помещении, где могут находиться люди. При транспортировке сосудов с жидким азотом на автомобилях и других видах транспорта необходимо надежно закрепить их во избежание падения. При падении сосуда Дьюара с жидким азотом может произойти взрыв вследствие нарушения целостности внутреннего сосуда.
Помещение, в котором находятся сосуды Дьюара с жидким азотом, должно быть оборудовано естественной или принудительной вентиляцией. Курение в этих помещениях категорически запрещается.
Особенно резко повышается концентрация азота в помещении вследствие пролива его при заливке или опорожнении сосудов, чего следует всеми мерами избегать. Если содержание кислорода в помещении снизить до 16%, человек теряет сознание без каких-либо предварительных симптомов, например головокружения.
При симптомах обморочного состояния пострадавшего следует вывести из помещения на свежий воздух.
Сосуды Дьюара необходимо два раза в год обеззараживать парами формалина. Для этого сосуд освобождают от жидкого азота путем полного испарения, обезжиривают и на металлическом стержне в него опускают жестяной цилиндр с порошком марганцево-кислого калия, облитого формалином. Через сутки сосуд вновь можно заполнять жидким азотом.
Для предотвращения загрязнения сосудов при заправке жидким азотом, конец гибкого шланга следует закрывать специально приготовленным чехлом из брезента. При заправке сосуда загнутый на конец шланга чехол расшнуровывают и передвигают в сторону ТРЖК, а освобожденный от чехла конец шланга опускают в сосуд.
7. Оценка, разбавление и замораживание спермы быков по французской технологии
При поступлении спермы через бактерицидный бокс, сразу определяется объем эякулята, затем берут образец для опреде-1 ления густоты и подвижности спермиев и данные заносятся в рабочий журнал, после чего при помощи дозатора отбирается проба для определения концентрации спермиев на фотометре! французской конструкции, который считывает количество! спермиев в 1 мл спермы и выдает на дисплее цифровые показа-1 тели через принтер на писчей бумаге по каждому эякуляту быка, j с указанием даты и времени взятия спермы, объема эякулятал! концентрации спермиев и степени разбавления спермы.
Разбавление спермы на основании данных автоматической го прибора производится согласно методике, которая будет из-| ложена ниже по тексту;
После автоматической фасовки, сперма в соломинках под-1' вергается эквилибрации в течение 4-5 часов на специальном оборудовании.
После эквилибрации соломинки со спермой раскладывают j в контейнеры с ячейками из расчета 100 соломинок в каждый} ]*
контейнер и помещают в морозильную установку, в котором соломинки подвергаются автоматической заморозке начиная с +4°С до -140°С, под непосредственным контролем компьютерной программы. Во время заморозки на мониторе выводится калибровочная кривая хода заморозки. После достижения температуры спермы в соломинках -140°С, соломинки загружают в сосуд с жидким азотом предварительно поместив согласно номера быка в мешочки из капроновой ткани, на которые заносится номер и кличка быка, его породная принадлежность. Из полученной свежей спермы, а также по завершении замораживания, отбираются образцы спермы для проведения оценки качества спермы и ее бактериологической обсемененности, а после месячного карантина сперма проверяется на активность.
Сохранение высокого оплодотворяющего потенциала семени в процессе замораживания и размораживания требует соответствующих условий для криоконсервации. Многочисленные исследования в течение последних 50 лет были направлены на усовершенствование процессов замораживания и размораживания семени производителей.
Установлено, что специфический размер спермы, его форма, содержание мембранного липида, протеиновый состав, метаболические условия влияют на условия, предъявляемые к криоконсервации половых клеток.
Несмотря на успешные исследования по соверншенствованию криоконсервации, некоторые сперматозоиды не могут выжить в процессе замораживания и размораживания. Имеют место две основные причины гибели клеток или ущерба для них:
♦ образование кристалликов льда внутри сперматозоидов (внутриклеточное образование льда) при применении быстрого j темпа замораживания, который наносит непоправимый вред мембранам спермы;
♦ развитие районов высокой концентрации растворенного вещества (эффект растворимости), которые обезвоживают клетки при использовании медленного темпа замораживания или I размораживания.
