Воспроизводство в скотоводстве

Целью некоторых процедур по замораживанию спермы является оптимизация темпа замораживания, чтобы гибель клетки, вследствие внутриклеточного образования льда и гипертонических растворов была сведена до минимума. Индивидуальные процедуры обработки спермы в лаборатории по криоконсервации включают:

• ♦ темп замораживания;

• ♦ время уравновешивания;

• ♦ время уравновешивания - темп таяния;

• ♦ темп таяния - темп замораживания;

• ♦ темп замораживания - уровень глицерина;

• ♦ уровень глицерина — темп размораживания. В результате этих взаимодействий оценка' эффекта инди- видуальных составляющих процесса криоконсервации по жизнеспособности спермы может быть не точной. Поэтому, нет чет-; кого определения для «лучшего» наполнителя для спермы или методики обработки.

• С самого начала развития техники криоконсервации спер- мы млекопитающих, глицерин, желток или молоко в большем части использовались как замороженные наполнители. Наполя нители, используемые для криоконсервации сперматозоидов быков, обычно содержат 20% желтка, а риск микробного зара! жения может иметь место.

IMV Techologies ввели новую концепцию криоконсерваЯ ции спермы быков: препарат Bioxcell ТМ, стерильный наполни! тель-желток, который был широко использован в центрах по ис| кусственному осеменению коров и телок во Франции. Подготовка наполнителя к использованию включае! следующие операции: К ♦ поместить бутылку со 100 мл концентрированного на! полнителя в водяную баню при температуре 32-34°С на 10 ми| нут;

• ♦ поместить 400 мл Erlemneyer дважды продистиллирован*

• ной стерильной охлажденной воды или эквивалент в водянука баню при температуре 32-34°С;

♦ прилить 100 мл концентрированного наполнителя в 400 мл дважды продистиллированной охлажденной стерильной воды или эквивалента. Ополоснуть бутылку дважды окончательным раствором;

♦ гомогенизировать раствор - наполнитель готов к использованию

Рекомендуется использовать наполнитель для разбавления в течение 6 часов с момента его приготовления.

Один раз приготовленный наполнитель Bioxcell ТМ может быть заморожен при температуре минус -20 С, желательно сразу после ее приготовления, для дальнейшего использования. Приготовленный раствор нужно разделить на дозы по 100 мл.

Размораживание должно быть проведено быстро (опустить колбочки прямо в водяную баню при 32-34°С на 15 минут). Не следует вновь замораживать приготовленный гомогенизированный наполнитель.

Методика одноступенчатого разведения при температуре 32-34°С

Упаковка спермы при комнатной температуре (20 С) производится следующим образом:

• ♦ после анализа спермы делается предварительный раствор

• 1:1с помощью Bioxcell при 32-34°С;

• ♦ гомогенизируют колбу с раствором один раз;

♦ выдерживают в термостате предварительно разведенную сперму на водяной бане в течение 10 минут при температуре 3234 С и проводят окончательное разбавление, добавляя предварительно разведенную сперму в наполнитель (не гомогенизировать);

• ♦ бутылочки с разведенной спермой оставляют при ком

• натной температуре на время от 10 до 15 минут;

♦ гомогенизируют и упаковывают сперму при температуре I 20 ’С. Концентрация спермиев в одной дозе (пайетгы объемом но 0,25 мл) должна быть не менее 15 млн. спермиев с прямолинейно-поступательным движением (ППД);

• ♦ размещают соломку горизонтально в пластиковом кон

• тейнере, затем ставят контейнер в холодную камеру с'температурой +4°С. Соломки должны быть защищены от холода, они могут выстоять при температуре от 20°С до +4°С в течение 1- 1,5 часа, количество соломок должно быть подогнано к типу используемого контейнера, Например: 300 мини соломок в кубке65 мм;

• ♦ выдерживают сперму о,т 3 до 5 часов вдали от света;

♦ помещают соломки на замораживающие полки в холодной камере (замораживающее устройство должно быть закрыто в холодной камере).

Упаковка семени при температуре +4°С производится в следующей последовательности:

• ♦ После анализа семени, делается предварительный раствор

• 1:1 Bioxcell при температуре 32-34°С; ♦ колбу с раствором гомогенизируют один раз; ♦ предварительно разведенную сперму выдерживают в

• термостате на водяной бане при температуре 32-34°С; ♦ делается окончательный раствор путем добавления пред-i

• варительно разбавленной спермы в наполнитель (не гомогензи-1 руют);

• ♦ поместить колбу с разведенной спермой в пластиковый]

• контейнер с постоянным уровнем воды в водяной бане при 321 °С (уровень воды не должен быть выше уровня разведенного] семени). Затем, контейнер помещают в холодную камеру с тем- ] пературой +4°С. (Рекомендуется поставить в воду термометр).] Когда температура достигнет 12-14 , можно добавить кубики] льда в воду. В любом случае, температура 4 °С должна быть] достигнута в течение 1-1,5 час; 1 ♦ выдерживают сперму от 3 до 5 часов вдали от света; ♦ упаковывают сперму в соломки с концентрацией сперми-1

• ев в одной дозе (пайетты объемом по 0,25 мл) не менее 25 млн. I спермиев с прямолинейно-поступательным движением (ППД); i ♦помещают соломки на полки в холодной камере; ♦замораживают сперму в соломках.