меньшая плотность и медленное отделение сыворотки у кислотно-сычужных сгустков. Особенно это важно в сыроделии, поэтому для производства сыра такое молоко не применяется. Примесь 15-25 % маститного молока в сборном (содержание соматических клеток более 1 млн/см3 ) снижает качество кисломолочных продуктов, масла. Установлено ухудшение вкуса пастеризованного молока в хранении при 6о С при его производстве из сырого с примесью анормального 25, 28, 59, 187 .
Для определения анормальности молока используют различные методы. Одна группа основана на контроле изменения химического состава и физико-химических свойств молока (рН, содержания натрия, хлора и лактозы, ферментативной активности и др), другая группа методов основана на определении в молоке количества соматических клеток путем прямого подсчета под микроскопом или специальных счетчиков. Используют и косвенные способы подсчета соматических клеток по изменению вязкости молока при добавлении к нему мастоприма, димастина и др. 25 .
Применяемые в настоящее время методы выявления мастита несовершенны, они не позволяют эффективно диагностировать возбудителя, а, следовательно, и проводить эффективное лечение 88, 110 . Не разработаны методы, позволяющие на генном уровне проводить селекцию на устойчивость животных к данному заболеванию.
Известно, что мастит является полиэтиологическим и полифакторным заболеванием. Микробную этиологию имеют 80% маститов. Если же мастит возникает по иным причинам, то все равно дальнейшее течение болезни осложняется микробным фактором, который в этом случае будет вторичным. Чаще причиной возникновения мастита становятся бактерии группы кишечной палочки, стафилококки, стрептококки. В последние годы наблюдается увеличение роли антибиотикоустойчивых микробов в этиологии маститов, что является результатом отсутствия эффективной диагностики возбудителя и предварительного проведения определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам с целью выбора наиболее эффективного препарата.
Массированное и часто необоснованное применение в ветеринарной медицине антибиотиков и химиотерапевтических препаратов, особенно широкого спектра действия, привело к появлению и распространению циркуляции бактерий с высокой резистентностью к данным препаратам 162 .
Для диагностики скрытой формы мастита чаще всего применяют экспресс – методы исследования молока с различными реактивами. Однако чувствительность последних неодинакова, они не всегда надежны и являются основанием для проведения отбора коров, подозрительных по заболеванию маститом 110 .
Идентификация бактериальных патогенов в молоке коров рассматривается как окончательный диагноз мастита. Она также дает информацию для профилактики и контроля этого заболевания. В большинстве клинических лабораторий методы идентификации основываются на микробиологическом анализе проб молока и биохимических тестах выделенных бактерий. Преимущество микробиологического исследования заключается в возможности идентифицировать бактерии и определить антимикробную чувствительность, т.е. получить информацию, на основании которой назначается лечение. Однако этот метод имеет ряд недостатков. Ограничивающим фактором является динамика инфекции. У коров с субклиническим маститом степень инфицированности в течение лактации колеблется от низкой до высокой. В культуре молока из долей вымени с субклиническим маститом можно не выявить бактерии из-за очень низкого количества патогенов или же присутствия в пробах остаточных антибиотиков, которые ингибируют рост бактерий in vitro. Кроме того, биологическое культивирование молока – это трудоемкий процесс. Идентификация видов бактерий стандартными биохимическими методами требует более 48 часов 271 .
Особую надежность для постановки диагноза мастита представляет полимеразная цепная реакция. Некоторые традиционные методы диагностики, например иммуноферментный анализ, выявляют белки-маркеры, являющиеся продуктами жизнедеятельности инфекционных агентов, что лишь дает опосредованное свидетельство наличия инфекции. Выявление специфического участка ДНК возбудителя методом ПЦР диагности-
рует присутствие возбудителя инфекции. ПЦР позволяет одновременно выявить многие патогены, которые могут быть причиной мастита. В этом случае в одну реакцию включены несколько пар праймеров, специфичных к различным сегментам ДНК, что дает возможность амплификации множественных последовательностей-мишеней в одном анализе. Идентификация бактерий основывается на амплификации гена-мишени, очень консервативного в пределах вида и изменчивого между видами. В настоящее время полимеразная цепная реакция используется для одновременного выявления и типирования нескольких видов бактерий и вирусов [271].
Наличие патогенной флоры можно обнаружить на ранних стадиях инфекции у животных-носителей, когда число бактерий в молоке очень низкое.
Инфекционное заболевание молочной железы, вызываемое Staph. аureus, до сих пор является одной из наиболее серьезных проблем молочных ферм во всем мире. Для дифференцировки штаммов Staph. аureus, выделенных у крупного рогатого скота, больного маститом, в настоящее время широко и успешно используется метод типирования фагов, но он имеет ряд недостатков, так как является технически требовательным. Как известно, повышенная патогенность микроорганизмов связана с наличием у них специфических факторов, которыми могут быть клеточные токсины, ферменты, разрушающие окружающие ткани, белки, подавляющие иммунный ответ и др. Выработка этих факторов контролируется соответствующими генами, которые часто образуют в геноме так называемые островки патогенности 211 .
Наличие специфического продукта ПЦР можно выявить разными методами: путем электрофоретического разделения, а в последнее время – по накоплению геноспецифичного флюоресцирующего продукта. Однако для более точной диагностики нередко применяется гибридизация исследуемых нуклеиновых кислот со специфическими молекулами-зондами по принципу комплементарности 221 .
Поэтому в настоящее время селекционная работа в скотоводстве должна быть направлена не только на создание новых
