академия ветеринарной медицины». Для изучения морфологического состава пробы крови брали из яремной вены с соблюдением правил асептики [107]. Для определения количества лейкоцитов, эритроцитов, гемоглобина кровь стабилизировали раствором гепарина.

В крови определяли количество эритроцитов и лейкоцитов, концентрацию гемоглобина, гематокрита – на гематологическом анализаторе Medonic СА – 620.

Биохимические исследования сыворотки крови включали:

• определение общего белка – рефрактометрическим мето-

дом,

• общего кальция – фотометрическим методом,

• неорганического фосфора - по Полсу в модификации

• В.Ф. Коромыслова и Л.А. Кудрявцевой,

• глюкозы – глюкозооксидантным методом,

• щелочного резерва – диффузионным методом по И.П.

• Кондрахину.

Для обнаружения микроорганизмов из пораженных долей брали секрет вымени коров, реагирующих на диагностикум бромтимоловый синий.

Проведены исследования по изучению ассоциации полиморфных вариантов гена CSN3 с частотой заболеваемости коров маститами.

Использовали ПЦР для диагностики возбудителей золотистого стафилококка.

ДНК выделяли из молока больных маститом животных с использованием наборов, изготовленных в институте биоорганической химии (реагент А и реагент В).

Для более точной постановки диагноза мастита у молочных коров был применен метод мультиплексной полимеразной цепной реакции, который позволил параллельно выявить двух основных бактериальных агенотов, вызывающих мастит у коров: S. аureus, S. аgalactiae.

При проведении мультиплексной ПЦР использовали праймеры, нуклеотидные последовательности которых соответствовали последовательностям, предложенным Forsman, al., 1997:

S. aureus: TCTTCAGAAGATGCCGAATA TAAGTCAAACGTTAACATACG

S. agalactiae: AAGGAAACCTGCCATTTG

TTAACCTAGTTTCTTTAAAACTAGAA

Для проведения ПЦР S. аureus и S. аgalactiae использовали реакционную смесь в объеме 50 мкл: 200 мкМ dATP , 10 мм буфер для проведения ПЦР (рН = 8,3), 50 мМ КCL и 200 нг экстрагированной ДНК.

ПЦР – программа: «горячий старт» – 95^о С – 5мин; 36 циклов: денатурация – 95^о С – 1мин, отжиг – 59^о С – 30 сек, синтез – 72^о С – 30 сек; элонгация –72^о С – 7 мин.

Продукты расщепления амплификата рестриктазой HаеIII представлены на рисунке 2.

Различий в уровне кормления и условиях содержания животных за учетный период в хозяйстве не наблюдалось.

Средняя арифметическая для качественных признаков отражает процент, или долю, особей, имеющих данный признак. В этом случае совокупность состоит из двух групп. Численность первой группы (р1), численность второй – (р2).

Долю животных, имеющих изучаемый признак (р), определяют по формуле:

р 1
р  (2.3)
n

где: n – число животных.

Здесь р соответсвует средней арифметической при количественной изменчивости. Доля остальных животных составляет:

р 2
р  (2.4)
n

Частота качественного признака, выраженная в долях единицы, или процентах, также имеет свою ошибку:

p  q
m 
n ; (2.5)

Ошибка является одинаковой для доли больных и здоровых животных: р±m  164  .

Селекционно-генетические параметры основных хозяйственно-полезных признаков определяли методами биологической статистики в описании Н.А. Плохинского [167], используя при этом компьютерные программы (Microsoft Excel, Minitab 14 Demo и SPSS).

В работе приняты следующие условные обозначения уровня значимости:

• – Р<0,05; ** – Р<0,01; *** – Р<0,001.

2.1 Выводы

Впервые в Республике Беларусь выполнены исследования с применением современных методических подходов в области ДНК-технологий, результаты которых применены для организации селекционного процесса в сельскохозяйственных предприятиях в дополнение к традиционным методам селекционноплеменной работы. Представленная методика исследований разработана для изучения возможности применения маркерных генов в селекции крупного рогатого скота для повышения молочной продуктивности и устойчивости к маститу.