для точности определения аминокислот при последующей за этим процессом хроматографии. Малейшее нарушение процесса гидролиза может привести к деструкции значительного количества аминокислот. Особенно большое внимание должно быть уделено сохранению соотношения навески к гидролизующему реагенту. Наиболее мягко гидролиз проходит в 6 н.НС1. В зависимости от температурных условий, давления, продолжительности гидролиза оптимальное соотношение навески к HCl, no данным различных авторов, составляет от 1:40 до 1:2000. Так, при гидролизе в колбах с обратным холодильником на бане при температуре 110—115° в течение 20—24 часов оптимальное соотношение 1:200; при гидролизе в автоклаве под давлением в две атмосферы и температуре 137° в течение 6 часов — 1:400, 1:1000; при гидролизе в запаянных ампулах в термостатах или бане при температуре 110° в течение 24—32 часов — 1:1000, 1:2000. Наиболее часто применяется гидролиз в запаянных ампулах, потому что в этом случае обеспечиваются благоприятные условия разложения белка и незначительные потери аминокислот. до Подготовленныйкомнатнойтемпературы для анализаиосвобождают гидролизат охлаждаютOTгуминов путем фильтрования в воронке Нутчи с использованием водоструйного насоса через двойной бумажный фильтр. Осадок на фильтре отмывается небольшим количеством подкисленного (на 10 мл воды 2—3 капли 6-нормальной НС!) соляной кислотой бидистиллята. Фильтрат освобождают от HCl выпариванием в колбах Вюрца (рис. 1 и 2) под вакуумом или на роторном испарителе при ляютобмываюттемпературенесколькостенки50—55°.миллилитровколбыК упаренномуи повторнобидистиллята,гидролизатувыпаривают.тщательнодобав-Полученный осадок растворяют бидистиллятом и переносят в градуированные пробирки (при объемном методе измерения) или в бюксы с известным весом (при весовом методе измерения). Весовой метод считается более точным. В бюксах гидролизаты сгущают в вакуумэксикатоpe под сухим КОН до нужного веса. Обычно расчеты веса, до которого необходимо сгустить гидролизат, производят путем деления азота (в мкг) в навеске прогидролизованного корма на 2000. В этом случае концентрация азота в гидролизатах различных образцов будет
7 i
| ; |
Mee -
msg Rpt оС acts ae
т: 5 Е em
АО | | ГД]
И | xy МИ НН [|
| © к J)
7 24 we) ee и}
(all : a = |
а.м oe ож i=
в Е : Эр = | <3) ssl
PROS TIE (BESS it ooiio" I cae Pea
В SRE aT =
eo
(Pie, 1. Абу ten (pear:
i А
ee | | Es |
рее И ide
|. | UN ste
een NS д и
=] [eeaeer th
ik cad } |
VA airs XG А |
ie Го
у W т т
das ЖЕ И т Pad! —_
у ANY eGа, © т
| — НИ ло
пиа Bt) Я гА,м.м SИВaas iia
а ИИ а: ОИ ah be
ИИ НЕ ce —
Рис. 2. Установка для вакуумного выпаривания HCl из гидролизатов в колбах Вюрца.
близкой. Подготовленный5, гидролизат переносят через фильтр в маленькие стеклянные пробирки с притертыми пробками и хранят в холодильнике. На хроматографическую бумагу наносят гидролизат с помощью капиллярных микропипеток различных коп-
струкций (рис. 3). Наносят ero не более 0,03 г полосой, отступив от края бумаги на 7 см. На листе бумаги (29X X65 см) размещают три полосы гидролизата и одну стандартной смеси чистых амннокиелот, Лучшими сорae кроматографической бумаги считаются Ватман SMM, немецкая Шлейхер — Шюлль 2043, английский А Ре ee t ‘
5 А — полуавтоматическаяРис. 3. Пипеткимикропипетка;випеткидля нанесенияна 0/1Б мл,— микропипетка,гидролизатов:сделанная из
В атман I, а также отечественные — Ленинградская «медленная» и «быстрая». Солевые примеси из отечественных сортов бумаги удаляют промыванием в 0,25%ва+ 81 мл уксуснойоксихиналинакис(2,5 г 8-оксихиналина+ Пот вода до объема | 3B сушкой. буи Я про. пускания через Hee ра- EZ | створителя — бутанол ZL + уксусная кислота + CE wa вода. Для промывки = AA | бумаги можно испольiS AA зовать также трилон Б. | \ Za | \ я Хроматографирова| ig If ние нанесенных на бу| | 7 | магу гидролизаторов и А BH | стандартных смесей 2 р производят в специаль< м AC ных хроматографичеС oa с кихукреплкам е рахнными(рис.в них4) : ‘YaРР р ванночками, заполненными растворителем. В камере поддерживается Рис. 4. Хроматографическая камера. 22
