7 i
| ; |
Mee -
msg Rpt оС acts ae
т: 5 Е em
АО | | ГД]
И | xy МИ НН [|
| © к J)
7 24 we) ee и}
(all : a = |
а.м oe ож i=
в Е : Эр = | <3) ssl
PROS TIE (BESS it ooiio" I cae Pea
В SRE aT =
eo
(Pie, 1. Абу ten (pear:
i А
ee | | Es |
рее И ide
|. | UN ste
een NS д и
=] [eeaeer th
ik cad } |
VA airs XG А |
ie Го
у W т т
das ЖЕ И т Pad! —_
у ANY eGа, © т
| — НИ ло
пиа Bt) Я гА,м.м SИВaas iia
а ИИ а: ОИ ah be
ИИ НЕ ce —
Рис. 2. Установка для вакуумного выпаривания HCl из гидролизатов в колбах Вюрца.
близкой. Подготовленный5, гидролизат переносят через фильтр в маленькие стеклянные пробирки с притертыми пробками и хранят в холодильнике. На хроматографическую бумагу наносят гидролизат с помощью капиллярных микропипеток различных коп-
струкций (рис. 3). Наносят ero не более 0,03 г полосой, отступив от края бумаги на 7 см. На листе бумаги (29X X65 см) размещают три полосы гидролизата и одну стандартной смеси чистых амннокиелот, Лучшими сорae кроматографической бумаги считаются Ватман SMM, немецкая Шлейхер — Шюлль 2043, английский А Ре ee t ‘
5 А — полуавтоматическаяРис. 3. Пипеткимикропипетка;випеткидля нанесенияна 0/1Б мл,— микропипетка,гидролизатов:сделанная из
В атман I, а также отечественные — Ленинградская «медленная» и «быстрая». Солевые примеси из отечественных сортов бумаги удаляют промыванием в 0,25%ва+ 81 мл уксуснойоксихиналинакис(2,5 г 8-оксихиналина+ Пот вода до объема | 3B сушкой. буи Я про. пускания через Hee ра- EZ | створителя — бутанол ZL + уксусная кислота + CE wa вода. Для промывки = AA | бумаги можно испольiS AA зовать также трилон Б. | \ Za | \ я Хроматографирова| ig If ние нанесенных на бу| | 7 | магу гидролизаторов и А BH | стандартных смесей 2 р производят в специаль< м AC ных хроматографичеС oa с кихукреплкам е рахнными(рис.в них4) : ‘YaРР р ванночками, заполненными растворителем. В камере поддерживается Рис. 4. Хроматографическая камера. 22
постоянная температура (20—25°C). Лучшие растворители: 6 танол-+ уксусная кислота - вода в соотношении 300: “60-140 астворитель хорошо разделяет цистин, лизин ги. стидин, АНИ аланин тирозин фенилалании при 3 4- разовом пропускании; бутанол-уксусная Е в соотношении 4:1:5 (одно пропускание), а затем в соотношении 40:15:5 (3—4-разовое пропускание) для разделения аспарагиновой кислоты, серина, гликокола, глутаминовой кислоты, треонина, метионина и валина; Н-бутиловый спирт-+муравьиная кислота (85%-ная)+ вода в соотношении 75:15:15 применяется для разделения аспарагиновой кислоты, серина, глицина, глутаминовой кислоты при 5-кратном пропускании.
После хроматографирования бумагу сушат в вытяжОHone шкафуПЕКилиgk”в понспециаявном отолущажениниостатковарастворийвсорильном шкафу под теля и проявляют 0,5%-ным раствором нингидрина в ацетоне. Обработанную в нингидриновом растворе бумагу сушат 3—5 минут в вытяжном шкафу для удаления ацетона и помещают в затемнеиный шкаф (сушильный) на 10—12 часов для интенсификации окраски. Сушить хроматограммы можно также в обычном сушильо.ном шкафу при температуре 60°С под током воздуха В результате реакции разделившихся на бумаге аминокислот с нингидрином образуются пятна разной степени окрашивания. Чтобы закрепить окраску пятен аминокислот, их смачивают из пипетки раствором азотнокислой меди (1 мл насыщенного раствора Cu(NOs)2+ +0,02 мл 65%-ной HNO; н 99 мл ацетона). Пятна аминокислот вырезают, помещают в пробирки и заливают 8 мл 75%-ного этилового спирта и оставляют на 2 часа в темноте. Экстинкция элюатов, полученных из окрашенных пятен, определяется на фотометре (ФЭК-М) в кювете на 10 мл при зеленом (если окраска не закреплена азотнокислой медью) или при синем (при закреплении окраски азотнокислой медью) светофильтре. теинуСодержаниерассчитываетсяаминокислпо ф о трмуле:в процентах к сырому про-
_E,A-C-10(1 0 0—K)
Е.О РМ 6,25
