где Е; — экстинкция амннокислоты исследуемого об- 7
Ey — экстиикция аминокислоты, стандарт;
А — количество аминокислоты в нанесенном в од-
СQ —— общееколичествону полосуколичествостандарта,гидролизата,гидролизата,г; нанесенногог или намл;одну
полосу на хроматограмме, г или мл;
Р — количество гидролизуемого образца;
K — содержание жира в воздущно-сухом вещест-
- М — содержание азота в воздушно-сухом вещест-
етсяСреднееиз 6содержаниепараллельныхкаждойпоказанийаминокислотыс двух хроматограмм.рассчитываОпределение аминокислот методом ионообменной хроматографии основано на разделении в полистироловых смолах с последующей элюцией, обработкой нингидрином и колориметрированием. Чаще в ионообменной хроматографии применяют катиониты типа Даукс-50, Амберлит JR-120 Зео-Карб и другие. Эти смолы относятся и катнонообменникам. При сульфировании они присое-
и. т
oa pilatesee : o
Е в. pele ae a
о a Ae
to & oa BE: eo
fees. В | о и
ee ie на: a ee cee a: rt
ie* №aeeeиa Е ae ie oa©eee Gg < yee;iedfTdeel oe| ›
в. ®[] . ох
о: ee о
(2 --- ег : es ae :
о м. °° i a. :
ом Я 7
a ee eeneee ae aa:
Е р OO OH
: PTS Mae Nee: Po Sere | ae
Е ie ae Ge i] ie
и 1 : м | ifs
Piles
SIR a ae fa Ry Е и
о ем. я р. в
а aoe ol Gee
о = не ие | |. on is
а ree us 3
р геА Baeey fee a. ee |
ie oa. Se. OY |
о : м> в -
м г ш и
| im | ‘=i ам о м
ar | eo __ af ae se ae
| See) о вый he Bae бе |
Pee | ee | Вере | te oo)
Г июнь ^^ ЗА ВЛЕВО ое В
Рис. 6. Автоматический апалиРис. т. И ПИР затор аминокислот Hd-—-1200E. затор и
диняют нонообменные группы ЗО3Н. В воде смолы силь но набухают, образуя гелеподобную массу. Когда DO: пускается гидролизат изучамого белкового вещества через колонку, заполненную понпообменной смолой, аминокислоты распределяются в соответствии с их Rj между водной фазой и фазой теля. Элювнруют аминокислоты буферными растворами при определелных рН. и Указанный метод, разработанный Муром и Стейном, позволил сконструировать для определения аминокислот специальные автоматические аминокислотные анализаторы типа KJIA-3 японской фирмы «Хитачи»: «Унихром» — американской; Hd=1200 Е чехословацкой и На автоматическом апализаторе пробу аминокислот вводят в верхнюю часть колонки анализатора вручную или с помощью автоматических заборников проб и элтои-
25
x <
x 8 s |
вс Е
SS 3 =
Е 3
а Ssа
А S
м |
=SI
=
5
Ss к |
з aS
Sy $ 55
SS Ss ЗЕ = NS =
В ЗЕ358558 535 FS85 85 = SSS35: 5533 |
Са Ss § а ЗЕ
SS за aS
7 |
A Puc.= ЕВ 8, ХроматограммыB= инеяausowicnor:в came . ©
руют буферный раствор для кислых аминокислот при pH-3,25, для нейтральных — 4,25, для основных — 58 которые нагнетаются насосами со скоростью 30 мл/час. После разделения в колонках амннокислоты выходят вместе с буферным раствором в определенной последовательпости, попадают в смесительную камеру, где смешиваются с раствором нингидрина, подаваемого нингидриновым насосом со скоростью 15 мл/час. Смесь посту-
26
