Реагенты

Это моноспецифические сыворотки, полученные путем сложной изоиммунизации крупного рогатого скота, предназначенные для определения групп крови.

Технические условия (ТУ)

1. Должны быть высокоспецифичными, т.е. реагировать только с одним антигеном.

2. Проходят обязательную унификацию в головном центре по экспертизе племенной продукции (материала).

3. Набор реагентов включает не менее 50 наименований сывороток для определения антигенов 1 0 систем.

4. Расфасованы во флаконы емкостью 10-20-50 мл по 125-250500 доз в каждом.

5. Маркировка флаконов: указывается предприятие-изготовитель, наименование иммуноспецифической сыворотки к определенному антигену, титр, количество в мл и дозах, номер серии, дата изготовления (месяц, год), срок годности, номер госконтроля, условия хранения.

6 . Дозой реагента считается 0,1 мл (две капли) рабочего раствора в замороженном состоянии.

1. Реагент должен обладать высокой активностью, т.е. иметь концентрацию антител, достаточную для выявления соответствующих антигенов в любом образце крови.

8 . Физические свойства: жидкость соломенно-желтого цвета до светло-коричневого. Не должно быть механических примесей и плесени. При длительном хранении допускается наличие осадка на дне.

1. Хранят реагенты в морозильных камерах при температуре не выше -20°С.

2. Срок годности — 2 года со дня изготовления при соблюдении правил хранения.

Комплемент

Это вещество, которое катализирует реакцию гемолиза при соединении антител, содержащихся в сыворотках, с антигенами эрит

роцитов крови. Комплемент содержится в нормальной сыворотке крови животных.

В реакции гемолиза при определении антигенов крови крупного рогатого скота используют кроличий комплемент.

Техника приготовления кроличьего комплемента

1. Кровь у кроликов можно брать двумя способами:

а) непосредственно из сердца — (кролика фиксируют на спине, вводят в ушную вену 1 мл теопентала, животное через 1 - 2 мин засыпает); из сердца длинной иглой берут 40-50 мл крови.

б) из ушной вены — (смазывают край уха ксилолом или толуолом, делают продольный разрез ушной вены размером 3 - 5 мм, кровь собирают в чашку Петри).

1. Кровь выдерживают при комнатной температуре 1,5-2 ч до свертывания и выделения сыворотки.

2. Отстоявшуюся сыворотку сливают в центрифужные стаканы и центрифугируют при 3000-3500 мин" 1 — 10 мин.

3. Сыворотку рекомендуется абсорбировать эритроцитами крупного рогатого скота, так как у некоторых кроликов встречаются естественные антитела типа гемолизинов.

4. Готовую сыворотку расфасовывают во флаконы по 10-20 мл.

Для повышения качества и активности комплемент готовят путем смешивания сывороток крови, полученных в один и тот же день от 1 0 и более кроликов.

ТУ на комплемент

1. Хранят комплемент при температуре -20°С до 6 месяцев.

2. Комплемент, сохранявшийся более 6 месяцев, используют после усиления его активности путем смешивания в различных соотношениях (1:1, 1:2, 1:3 и 1:4) со свежеполученным. Соотношение зависит от истинной активности хранившегося и свежеполученного комплемента.

3. Активность комплемента проверяют первый раз после трехмесячного хранения путем постановки реакции гемолиза с 1 0 - 2 0 образцами крови.

Консерванты крови

Образцы крови для определения эритроцитарных антигенов необходимо консервировать антикоагуляционным растворам (антикоагулянтом).

Техника приготовления антикоагуляционных растворов

На аналитических весах делают навески всех ингредиентов.

В мерную колбу на 1000 мл вносят: навески лимоннокислого натрия и глюкозы, 300-400 мл кипяченой дистиллированной воды, температуру раствора доводят до температуры 36-37°С, вносят навески альбуцида и риванола, доводят объем раствора до метки 1000 мл дистиллированной водой при температуре 36-37°С, смесь перемешивают и фильтруют через ватно-бумажный фильтр.

Раствор хранится в холодильнике при температуре 4°С в течение 1-1,5 месяцев.