Массированное и часто необоснованное применение в ветеринарной медицине антибиотиков и химиотерапевтических препаратов, особенно широкого спектра действия, привело к появлению и распространению циркуляции бактерий с высокой резистентностью к данным препаратам 162 .
Для диагностики скрытой формы мастита чаще всего применяют экспресс – методы исследования молока с различными реактивами. Однако чувствительность последних неодинакова, они не всегда надежны и являются основанием для проведения отбора коров, подозрительных по заболеванию маститом 110 .
Идентификация бактериальных патогенов в молоке коров рассматривается как окончательный диагноз мастита. Она также дает информацию для профилактики и контроля этого заболевания. В большинстве клинических лабораторий методы идентификации основываются на микробиологическом анализе проб молока и биохимических тестах выделенных бактерий. Преимущество микробиологического исследования заключается в возможности идентифицировать бактерии и определить антимикробную чувствительность, т.е. получить информацию, на основании которой назначается лечение. Однако этот метод имеет ряд недостатков. Ограничивающим фактором является динамика инфекции. У коров с субклиническим маститом степень инфицированности в течение лактации колеблется от низкой до высокой. В культуре молока из долей вымени с субклиническим маститом можно не выявить бактерии из-за очень низкого количества патогенов или же присутствия в пробах остаточных антибиотиков, которые ингибируют рост бактерий in vitro. Кроме того, биологическое культивирование молока – это трудоемкий процесс. Идентификация видов бактерий стандартными биохимическими методами требует более 48 часов 271 .
Особую надежность для постановки диагноза мастита представляет полимеразная цепная реакция. Некоторые традиционные методы диагностики, например иммуноферментный анализ, выявляют белки-маркеры, являющиеся продуктами жизнедеятельности инфекционных агентов, что лишь дает опосредованное свидетельство наличия инфекции. Выявление специфического участка ДНК возбудителя методом ПЦР диагности-
рует присутствие возбудителя инфекции. ПЦР позволяет одновременно выявить многие патогены, которые могут быть причиной мастита. В этом случае в одну реакцию включены несколько пар праймеров, специфичных к различным сегментам ДНК, что дает возможность амплификации множественных последовательностей-мишеней в одном анализе. Идентификация бактерий основывается на амплификации гена-мишени, очень консервативного в пределах вида и изменчивого между видами. В настоящее время полимеразная цепная реакция используется для одновременного выявления и типирования нескольких видов бактерий и вирусов [271].
Наличие патогенной флоры можно обнаружить на ранних стадиях инфекции у животных-носителей, когда число бактерий в молоке очень низкое.
Инфекционное заболевание молочной железы, вызываемое Staph. аureus, до сих пор является одной из наиболее серьезных проблем молочных ферм во всем мире. Для дифференцировки штаммов Staph. аureus, выделенных у крупного рогатого скота, больного маститом, в настоящее время широко и успешно используется метод типирования фагов, но он имеет ряд недостатков, так как является технически требовательным. Как известно, повышенная патогенность микроорганизмов связана с наличием у них специфических факторов, которыми могут быть клеточные токсины, ферменты, разрушающие окружающие ткани, белки, подавляющие иммунный ответ и др. Выработка этих факторов контролируется соответствующими генами, которые часто образуют в геноме так называемые островки патогенности 211 .
Наличие специфического продукта ПЦР можно выявить разными методами: путем электрофоретического разделения, а в последнее время – по накоплению геноспецифичного флюоресцирующего продукта. Однако для более точной диагностики нередко применяется гибридизация исследуемых нуклеиновых кислот со специфическими молекулами-зондами по принципу комплементарности 221 .
Поэтому в настоящее время селекционная работа в скотоводстве должна быть направлена не только на создание новых
пород и популяций скота с ценными хозяйственно-полезными признаками (высокая молочная продуктивность, жирномолочность, хорошая скорость молокоотдачи, пригодность к машинному доению, длительность хозяйственного использования, высокие репродуктивные качества, крепкая конституция), но и на резистентность к различным заболеваниям, в том числе к маститу. Все эти качества должны стойко передаваться по наследству как со стороны отцов, так и матерей 173 .
Исследования, проводимые во многих странах мира, свидетельствуют, что среди множества причин, способствующих возникновению заболевания молочной железы коров маститом, наиболее значимой является генетическая предрасположенность животных, а степень маститоустойчивости в определенной степени зависит от наследственных качеств отцов (быковпроизводителей). В связи с этим интерес представляют исследования, направленные на выявление не только тест-систем, диагностирующих возбудителя, но и ДНК-маркеров предрасположенности и устойчивости животных к данному заболеванию, дающих возможность проводить селекционные программы на устойчивость молочного скота к маститам.
Сейчас уже становится очевидным, что инфекционное заболевание есть результат взаимодействия генов вирулентности инфекционного агента, генов иммунного ответа и факторов внешней среды (в том числе лечебных препаратов). Современные молекулярно-биологические методы позволяют быстро и успешно проводить идентификацию известных генов и их вариантов (аллелей), дополняя существующие микробиологические и иммунологические подходы 221 .
1.6 Взаимосвязь между количественными признаками у крупного рогатого скота
Известно, что сельскохозяйственные животные обладают большим разнообразием морфологических, физиологических хозяйственно-полезных признаков. Многие из них имеют боль-
