На сегодняшний день геном M. haemolytica расшифрован практически полностью, его величина составляет 2 569 125 п.н. с соотношением G+C нуклеотидов 41%. В результате данного исследования в геноме данного микроорганизма были выявлены различные нуклеотидные последовательности, которые кодируют белки, играющие роль регуляторов транскрипции M.haemolytica. В свою очередь, регуляцией транскрипции обеспечивается синтез и активация различных факторов вирулентности микроорганизма, что, возможно, позволяет объяснить механизм взаимодействия M. haemolytica с макроорганизмом, а именно переход от комменсализма к паразитизму и изменение взаимодействия «микроорганизм-клетка» [220].
Наиболее полно изучен ген 16S RNA, один из самых консервативных генов M. haemolytica, данные о нуклеотидных последовательностях которого послужили основой при определении филогенетического родства и разработки современной таксономии и геносистематики микроорганизмов семейства Pasteurellaceae и рода Mannheimia. Так же детально изучен оперон генов IktCABD, кодирующих термолабильный лейкотоксин M. haemolytica. Установлено, что синтез, активацию и секрецию лейкотоксина кодируют четыре гена полицистронного оперона: ген IktC кодирует внутреннюю ацилтрансферазу, необходимую для ацилации, продукции и последующей активации ЛКТ (вероятно ациклично активирует IktA); ген IktА кодирует структурный токин (белок 102 kDa); продукты генов IktB и IktD способствуют секреции токсина.
По результатам некоторых исследований установлено, что из всех генов оперона IktCABD ген IktD является наиболее консервативным, а ген IktA наиболее полиморфным. Кроме этого, в исследованиях R. Davies с соавт. (2001) показано наличие множества мозаичных по структуре аллелей гена IktA, а проведённый филогенетический анализ штаммов P.haemolytica от крупного и мелкого рогатого скота позволил установить, что мозаичность и множество аллелей гена IktА может свидетельствовать о процессах рекомбинации между генами IktA таких микроорганизмов как M. haemolytica, M. glycosida и Pasteurella trehalosi [221].
Кроме генов, кодирующих лейкотоксин, на сегодняшний день определены первичные структуры генов, кодирующих различные по природе факторы вирулентности M. haemolytica, такие как ген sod А, кодирующий супероксиддисмутазу - металлофермент, катализирующий реакцию дисмутации супероксидных радикалов, защищающий клеточные структуры от повреждающего действия радикалов кислорода. Нуклеотидные последовательности гена sodA изучены для всех представителей рода Mannheimia и для некоторых представителей других родов семейства Pasteurellaceae. Кроме того, изучены ген отрА, ген папН, гены lpp-5 (pip А- Е), локус генов cap, гены IpsA и galE, кодирующие
белки наружной мембраны, нейраминидазу, липопротеины и полисахариды [205,207]. Последовательности геномной ДНК кодируют всю наследственную информацию, ответственны за микробиологическую репликацию, вирулентность, высокую специфичность, способность противостоять иммунной системе; знание обширного генома Pasteurella multocida как патогена, дает всю необходимую информацию, нужную для эффективных и целевых исследований в лечении, профилактике и диагностике болезней, вызываемых этим возбудителем. Thomas S. Whittam, Vivek Kapur [221] провели сравнительный анализ полных геномов Pasteurella multocida, Haemophilus influenzae и Escherichia coli. Были выровнены 1197 кодирующих последовательностей всех 3 организмов, установлен процент идентичности аминокислот в выравнивании. Установлено эволюционное родство между Pasteurella multocida, Haemophilus influenzae и Escherichia coli. Сравнение последовательностей позволило различить 200 кодирующих последовательностей (10%), уникальных для Pasteurella multocida и 1197 кодирующих последовательностей ортологичных геномам Haemophilus influenzae и Escherichia coli. Эти результаты согласуются с тем, что они полностью близкородственны и подтверждают классификацию этих бактерий в Υ подразделе протеобактерий.
Состав полного генома Pasteurella multocida Количество кодирующих последовательностей – 2014 Гомологичные пептидам – 1814 Гомологичные протеинам – 531
Кодирующие последовательности уникальние для Pasteurella multocida - 200
Гомологичные Haemophilus influenzae - 1421 Гомологичные Escherichia coli - 1392 Ортологичные Escherichia coli - 223 Ортологичные Haemophilus influenzae - 195 Содержание GC пар - 41% Средний молекулярный вес белков - 37,081Кд Средний размер генов - 997 п. о тРНК - 57 рРНК опероны - 6
Анализ данных литературы показал, что пастереллезная инфекция имеет широкое распространение во многих странах, в том числе и в Республике Казахстан. На территории Казахстана, согласно данным
ветеринарной отчетности, имеются энзоотические вспышки пастереллеза среди крупного рогатого скота, лошадей, свиней, птиц. К пастереллезу восприимчивы крупный рогатый скот, лошади, мелкий рогатый скот, буйволы, козы, свиньи, грызуны, кошки, собаки, дикие животные, домашние и дикие птицы.
Пастереллез распространен повсеместно, но чаще регистрируется в странах с тропическим и субтропическим климатом. Достаточно широко пастереллез распространен на территориях стран СНГ, в том числе и в Казахстане. Летальность при пастереллезе колеблется от 10 до 100%.
Диагноз пастереллеза ставится комплексно, с учетом данных эпизоотологии, клиники, данных патологоанатомических изменений и бактериологического исследования. Каждый из методов диагностики имеет ценность лишь в совокупности с другими методами, в особенности с результатами патологоморфологических и лабораторных исследований.
Обнаружение у заболевших животных сходной с пастереллезом клинической картины не дает права ставить диагноз на пастереллез, так как имеется ряд заболеваний, клиническое течение которых очень напоминает пастереллез. Патологоанатомические данные достаточно выражены при остром течении пастереллеза, но не патогномоничны, и ставить диагноз только на основании их нельзя.
Для бактериологического исследования в лабораторию посылают отдельные органы. Выделение культуры пастерелл при бактериологическом исследовании без учета результатов, полученных другими диагностическими методами, также не дает оснований для постановки диагноза на это заболевание, так как при пастереллезе наблюдается широкое бактерионосительство как среди переболевших, так и среди клинически здоровых животных, контактировавших, а иногда и неконтактировавших с животными неблагополучных хозяйств. Совокупность сведений по эпизоотологии, клинической и патологоанатомической картине дает право на постановку предварительного диагноза, результаты же бактериологических и биологических исследований позволяют поставить диагноз окончательно.
Серологический диагноз при пастереллезе имеет меньшее значение, чем такие методы диагностики, как бактериологический и биологический, так как болезнь протекает быстро. Но с целью своевременного и более полного выявления и в неблагополучных и в благополучных хозяйствах скрытых больных и животныхпастереллоносителей применение серологических реакций имеет немалое значение.
