Современные представления об основных компонентах, ассоциированных с капсульным веществом, можно резюмировать так:

1) β-антиген – типоспецифический полисахарид, адсорбируется на эритроцитах в реакции непрямой гемагглютинации: встречается в микроорганизмах, которые дают флюоресцирующие и мукоидные варианты;

2) d-комплекс – полисахаридно-белковый, тесно прикрепляющийся к клеточной стенке, иммуногенный, видимо, в некоторой степени лабильный;

3) γ-антиген – липополисахарид, встречающийся у микроорганизмов всех вариантов, входящий в состав клеточной стенки; у каждого одна или более антигенных детерминант, ответственных за различные О-, или соматические, серовары [131,132].

Многие исследователи указывают на вариабельность биохимических свойств возбудителя пастереллеза. По данным некоторых исследователей биохимический тест нельзя использовать для дифференциации штаммов возбудителя различного зоологического происхождения, который заключается в сбраживании сахарозы, глюкозы [133,134]. Khalifa I.A., напротив, установил зависимость биохимических свойств штаммов от зоологического происхождения. [135]. По данным Breed R.S. et al. [136], Pasteurella multocida, как правило, не ферментирует лактозу, но имеются исключения. Так, штаммы разлагающие лактозу, описаны некоторыми учеными. Эти бактерии обычно не свертывают молоко, не изменяют его реакцию [137,138]. Pasteurеlla multocida не коагулирует плазму кролика и морской свинки. Желатину и свернутую сыворотку не разжижает, не вызывает гемолиза, но образует индол и сероводород. Восстанавливает нитраты до нитритов, дает отрицательную пробу с метиленовым красным. Мочевину не разлагает, разрушает перекись водорода. Ферментирует сахара, спирты и гликозиды с образованием кислоты без газа. Как указывают Breed R.S. и др., Pasteurella multocida сбраживает глюкозу, сахарозу, фруктозу, сорбит, галактозу, маннозу и как правило, маннит, ксилозу и трегалозу; не ферментирует лактозу, дульцит, амигдалин, рафинозу, рамнозу, адонит, декстрин, инулин, глицерин, эритрит, салицин, мальтозу и арабинозу. У Pasteurella multocida видовым признаком следует считать лишь способность ферментировать глюкозу, сахарозу, маннозу и галактозу с образованием кислоты без газа, не разжижать желатину, не свертывать и не пептонизировать молоко и, как правило, не образовывать сероводород [85,112,133,134,139,140].

1.2 Диагностика пастереллеза

Диагноз пастереллеза ставится комплексно, с учетом данных эпизоотологии, клиники, данных патологоанатомических изменений и

бактериологического исследования. Каждый из методов диагностики имеет ценность лишь в совокупности с другими методами, в особенности с результатами патологоморфологических и бактериологических исследований [115,139,141].

Обнаружение у заболевших животных сходной с пастереллезом клинической картины не дает права ставить диагноз на пастереллез, так как имеется ряд заболеваний, клиническое течение которых очень напоминает пастереллез. Патологоанатомические данные достаточно выражены при остром течении пастереллеза, но не патогномоничны, и ставить диагноз только на основании их нельзя. Выделение культуры пастерелл при бактериологическом исследовании без учета результатов, полученных другими диагностическими методами, также не дает оснований для постановки диагноза на это заболевание, так как при пастереллезе наблюдается широкое бактерионосительство как среди переболевших, так и среди клинически здоровых животных, контактировавших, а иногда и неконтактировавших с животными неблагополучных хозяйств. Совокупность сведений по эпизоотологии, клинической и патологоанатомической картине дает право на постановку предварительного диагноза, результаты же бактериологических и биологических и молекулярно-биологических исследований позволяют поставить диагноз окончательно [139,142]. Клинические признаки не имеют большого диагностического значения. Исключительно ценные данные для правильной постановки диагноза при остром и подостром течениях пастереллеза дают патологоанатомическое исследования. Прижизненная бактериологическая диагностика пастереллеза также не имеет большого значения, чаще исследуют материал от павших животных. Результаты лабораторного исследования этого материала дают возможность уточнить первоначальный диагноз [6,7,9,17,18,37].

Для бактериологического исследования в лабораторию посылают отдельные органы (сердце, селезенку, печень и др.). Патологический материал лучше посылать свежий или замороженный, либо в консервирующей жидкости – 30%-ный водный раствор глицерина.

Бактериологическая диагностика пастереллеза слагается из

следующих методов:

• микроскопии мазков крови или мазков-отпечатков внутренних органов (печень, селезенка);

• выделения культур P.multocida из патологического материала путем высева на искусственные питательные среды или биологическим методом, заражая лабораторных животных;

• идентификации культуры;

• определения вирулентности выделенных культур на лабораторных животных.

При острых инфекционных болезнях, к которым относится и пастереллез, серологический диагноз имеет меньшее значение, чем такие методы диагностики, как бактериологический и биологический, так как болезнь протекает быстро. Но с целью своевременного и более полного выявления и в неблагополучных и в благополучных хозяйствах скрытых больных и животных-пастереллоносителей применение серологических реакций имеет большое значение.

Для серологической диагностики используют реакции агглютинации, связывания комплемента, преципитации, гемагглютинации, адсорбции агглютининов и другие.

Реакцию агглютинации (РА) пробовали применять для выявления птиц-пастереллоносителей, но отсутствие стандартных антигенов не позволяло дать объективную оценку этому методу диагностики, хотя S.Nomioka и M.Murata довольно успешно с помощью реакции агглютинации разделили соматические антигены на несколько групп. По различию в О-антигенном строении изученные 166 штаммов (выделенных от крупного рогатого скота – 26; свиней – 43; овец – 7; мышей – 18; кошек – 1; птиц – 69; человека - 2) были распределены на 10 групп. Группируя по соматическому и капсульному антигенам, все штаммы удалось разделить на 12 серологических типов (групп). В капсульную группу А входило пять соматических групп (1, 3, 5, 7 и 9), в группу Д – пять О-групп (1, 2, 3, 4 и 10) и одна из О-групп (6) была в группе В (G.R.Carter), к 12-му серотипу отнесены все остальные штаммы. На основании полученных данных авторы предлагают характеризовать штаммы P.multocida по соматическому и капсульному антигенам и в связи с этим именовать их 1:А, 3:А, 2:В и т.д. Штаммы 1:А и 3:А имеют общий капсульный антиген А, но различные (1 и 3) соматические антигены. Почти все культуры от цыплят и уток, больных пастереллезом, принадлежали к серотипу 5:А, от индеек - К 9:А. Несколько штаммов типа 2:Д были изолированы от цыплят при хроническом течении пастереллеза [48,92,70].

Большинство авторов ставили РА по обычно принятой методике, но антигены готовили по-разному, поэтому результаты, полученные с испытуемыми сыворотками птиц, были неодинаковыми.

S.Nomioka и M.Murata для постановки РА на стекле была предложена упрощенная методика. Антиген получали по особой методике – культуру пастерелл выращивали на УРС-агаре, предложенном авторами, причем рост был обильным, затем смывали формализированным буферным раствором. Типовые (эталонные) антисыворотки готовили по капсульному антигену штаммов А, В, С, Д по G.R.Carter. S.Nomioka и M.Murata применяли РА также для типирования пастерелл не только по капсульному антигену, но и по соматическому [48].