pfhB2 потенциальные носители вирулентности. Оба гена высоко гомологичный с filamentoushemagglutinin (fbaB) B. pertussis, который отвечает за проникновение Pasteurella multocida в клетку хозяина. Центральный регион этих белков содержит интегрин-связывающие участки, участвующие в адгезии B. Pertussis. Более того, карбоксильная группа этих белков содержит участки, с 66% гомологичностью с сыворотко-устойчивым белком р76 Heamafilussomnus. Наличие р76 обуславливает сопротивление опсонизации, тем самым увеличивая выживаемость патогена в хозяине.
По работам FerreiraT.S.Petal. (2012), среди генов кодирующих порины наружной мембраны, наиболее ярко выражены гены tadD (93.4%), ptfA (91.3%), omp87 (84.7%).
Для моделирования праймеров нами взяты нуклеотидные последовательности генов, кодирующих порины наружной мембраны Pasteurella multocida из базы данных Genbank , с использованием пакета компьютерных программ Vector NTI Advance 9, проведено попарное сравнение последовательности нуклеотидов между собой для определения наиболее вариабельных и консервативных участков генома. Характеристики и параметры выбранны праймеров были установлены с помощью программы Oligo Analizer.
В результате исследований было сгенерировано 3 пары праймеров. Подобранные пары праймеров с основными характеристиками представлены на рисунках 14,15 и в таблице 9.
Вывод программы из оригинала — последовательности и расчётные данные
Primer 1
Primer: 5ґ-TTCTACCCATTCTCAGCAAGGC-3ґ
Reverse: 3ґ-CGGAACGACTCTTACCCATCTT-5ґ
Length: 22 nt
Tm (basic): 66,0 0C
Tm (salt): 62,1 0C
Tm (NN): 64,9 0C
GC %: 50,0 %
dG: -42,1 kCal/mol
3'-tail GC %: 71,4 %
3'-tail dG: -14,9 kCal/mol
Molecular weight: 6692,3 g/mol
1 ml of the primer solution with an absorbance of 1 at 260
nm is 4,57 µM and contains 30,6 µg ssDNA
Primer 1 self annealing:
None!
Primer 1 loops:
None!
Primer 2
Primer: 5ґ-ATCATTTCGGGCATTCACC-3ґ
Reverse: 3ґ-CCACTTACGGGCTTTACTA-5ґ
Length: 19 nt
Tm (basic): 56,0 0C
Tm (salt): 55,2 0C
Tm (NN): 63,0 0C
GC %: 47,4 %
dG: -38,2 kCal/mol
3'-tail GC %: 42,9 %
3'-tail dG: -11,4 kCal/mol
Molecular weight: 5800,8 g/mol
1 ml of the primer solution with an absorbance of 1 at 260
nm is 5,28 µM and contains 30,6 µg ssDNA
Primer 2 self annealing:
None!
Primer 2 loops:
None!
Primer 1 - Primer 2 annealing:
5'-TTCTACCCATTCTCAGCAAGGC-3'
: ||| : :
3'-CCACTTACGGGCTTTACTA-5'
dG: -2,93 kcal/mol
Вывод программы из оригинала — последовательности и расчётные данные
Primer 1
Primer: 5ґ-AGCGAGCAACAGATAACG-3ґ
Reverse: 3ґ-GCAATAGACAACGAGCGA-5ґ
Length: 18 nt
Tm (basic): 54,0 0C
Tm (salt): 53,8 0C
Tm (NN): 57,5 0C
GC %: 50,0 %
dG: -34,4 kCal/mol
3'-tail GC %: 42,9 %
3'-tail dG: -10,9 kCal/mol
Molecular weight: 5612,6 g/mol
1 ml of the primer solution with an absorbance of 1 at 260
nm is 4,58 µM and contains 25,7 µg ssDNA
Primer 1 self annealing:
None!
Primer 1 loops:
None!
Primer 2
Primer: 5ґ-AGGCATGACTGTCACAAC-3ґ
Reverse: 3ґ-CAACACTGTCAGTACGGA-5ґ
Length: 18 nt
Tm (basic): 54,0 0C
Tm (salt): 53,8 0C
Tm (NN): 55,0 0C
GC %: 50,0 %
dG: -31,2 kCal/mol
