Как видно из таблицы 4 вирулентность эпизоотических штаммов пастерелл для белых мышей составило 15 - 100 КОЕ.

2.2.3 Изучение биологических свойств штамма Pasteurella multocida 90

Из коллекции музея лаборатории противобактериозной биотехнологии получаем лиофильно высушенные штамм P.multocida 90. Ампулу с аморфным веществом растворяем физиологическим раствором [рН 7,2-7,4] получаем 20 млрд. КОЕ, затем проводим серийное разведение и из 5, 6 пробирки производим посевы по 0,1 см³ в чашки Петри для подсчета количества колоний. Через 24 часа после инкубации при визуальном просмотре роста колоний в чашки Петри должно быть не менее 100-200 КОЕ.

На питательных средах культуры P.multocida 90 сохраняют исходные свойства не более 10 пассажей. Поэтому в период использования данного штамма пастерелл проводили пассажи культур на белых мышах, что обеспечивало повышение их вирулентности. Так как иммуногенные свойства возбудителя обусловлены наличием капсулы, не менее важным условием является сохранение музейных штаммов пастерелл в фазе, образования капсулы, а этим условием является животный организм, из которого выделен данный штамм.

Нами были изучены морфологические, культуральные, биохимичесике, вирулентные свойства музейного штамма P.multocida 90.

Штаммы P.multocida 90 – короткие овоидные палочки (длиной 0,31,5 мкм и шириной 0,15-0,25 мкм), грамотрицательные, неподвижные (рисунок 4). Отмечается биполярность при окраске по РомановскомуГимзе, при окрашивании по Михину обнаруживали капсулу, ее наличие связано со степенью вирулентности штаммов.

Как видно из рисунка, в мазках пастереллы располагаются изолированно иногда парами, реже в виде цепочек

Культуральные свойства изучали при посеве на плотные и жидкие питательные среды при температуре 37⁰ , рН 7,2-7,4. По характеру роста на плотных питательных средах (МПА) обогащенной 5%-ой сывороткой крови лошади выявили три типа колоний: гладкую S-форму, которые представляют собой мелкие, гладкие, округлые, прозрачные с голубоватым оттенком ровными краями (рисунок 7).

На необогащенном МПА пастереллы растут в виде нежных мелких росинчатых колоний, слегка опалесцирующих в проходящем свете (рисунок 8). Для выделения чистых культур пастерелл производили дробный посев исследуемого патологического материала на чашки Петри с обогащенными средами МПА (по две-три чашки на каждое исследование).

Как видно из рисунка в косопроходящем свете колонии имеют радужное свечение, что связано с капсулообразованием. При длительном хранении культур происходила диссоциация, в результате чего S-форма колоний переходила в R и М - формы. R-форма представляет собой непрозрачные с шероховатыми краями колонии, а М-форма (мукоидная) слизистые, с неровными краями колонии. Также, при изучении культуральных свойств, производили посевы пастерелл в бульон Хоттингера и МПБ (рисунок 9).

Как видно из рисунка при культивировании пастерелл в бульоне Хоттингера и МПБ штамм Pasteurella multocida 90 давал типичный рост, вызывая равномерное помутнение среды с образованием незначительного осадка на дне культивируемого сосуда, при встряхивании отмечаются муаровые волны, по мере старения культуры происходит просветление среды с образованием слизистого осадка на дне пробирки, поднимающегося при встряхивании в виде косички. Штамм Pasteurella multocida 90 обладает специфическим запахом, не образуют пленку и пристеночного кольца

Данные результатов изучения биохимических свойств Pasteurella multocida 90 отражены в таблице 3.

Таблица 5 – Биохимические свойства штамма Pm 90