2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
Опыты по определению распадаемости, переваримости протеина кормов и использования аминокислот проводились в условиях вивария ВНИИФБиП сельскохозяйственных животных на трёх сложнооперированных бычках с наложением канюли рубца (Алиев А.А., 1974), внешнего анастомоза в начальной части двенадцатиперстной кишки (Синещеков А.Д., 1965) и Т-образной шлюзированной канюли в конце подвздошной кишки (Алиев А.А., 1985). Опыт проводился методом латинского квадрата на трёх растущих бычках холмогорской породы, подобранных по принципу аналогов, в возрасте 7 месяцев (Овсянников А.И., 1976). При изучении переваримости протеина отдельных кормов дополнительно проводились исследования на трёх оперированных коровах холмогорской породы имевших простую канюлю рубца и двенадцатиперстной кишки. В другой серии опытов, проведённых в разные годы в условиях вивария Пензенской ГСХА, распадаемость протеина определяли в рубце трёх взрослых валухов породы советский меринос, трёх баранчиках цигайской породы и четырёх бычков чёрно-пёстрой породы, имевших канюли рубца.
Для характеристики ферментативных процессов в рубце у бычков до утреннего кормления и через 3 и 6 часов после кормления брали пробы рубцовой жидкости, в которой определяли концентрацию аммонийного азота по Конвею, общего и белкового азота – по Къельдалю на аппарате Сереньева, рН – на потенциометре ЭВ-74. Белковый азот рубцовой жидкости осаждали солями тяжёлых металлов (5%-й ZnSo4). Небелковый азот находили расчётным путём по разнице общего и белкового азота. Рубцовое содержимое, предназначенное для выделения фракций бактерий и простейших, было отобрано у опытных животных путём многократного взятия проб в течение суток. После взятия, рубцовое содержимое выдерживали 48 часов в 0,2%-м растворе Твин-80, приготовленном в 10%-м растворе формалина, затем фильтровали через четыре слоя марли, а из фильтрата путём дифференциального центрифугирования выделяли фракции бактерий и простейших (Курилов Н.В., Севастьянова Н.А. и др., 1987).
В суточных опытах учитывали количество химуса, поступающего из преджелудков в двенадцатиперстную кишку и далее в толстый отдел кишечника. На каждом рационе данные опыты проводи-
лись в течение 2 суток, по 12 часов с перерывом в 1 день. В конце каждого часа отбирали среднюю пробу дуоденального химуса в количестве 1 % и подвздошного химуса 2 % от прошедшего за час. Полученные пробы химуса фиксировали формалином. В средних пробах дуоденального и подвздошного химуса определяли содержание сухого вещества (СВ), сырого протеина (СП) и белкового азота по Къельдалю, количество аммонийного азота микродиффузионным методом в чашках Конвея, бактериальный протеин по диаминопимелиновой кислоте (ДАПК). Общие аминокислоты и ДАПК определяли на автоматическом анализаторе типа ААА-339 (ЧССР). Расчёт количества бактериального протеина проводили на основе полученного отношения ДАПК к азоту сухого вещества фракций бактерий и простейших, выделенных из рубцового содержимого (Курилов Н.В., Севастьянова Н.А и др., 1979).
Перед каждым основным периодом бычки в течение 21 дня содержались предварительно на изучаемых рационах. В конце каждого периода проводили балансовый опыт с учётом потреблённого корма, выделенного кала и мочи по общепринятой методике (Овсянников А.И., 1976). В полученных пробах мочи определяли содержание общего азота, в кале – сухого вещества, общего азота и аминокислотный состав.
Определение распадаемости протеина (РП) исследуемых кормов в рубце проводили методом «in sacco» с использованием мешочков, изготовленных из синтетической ткани, согласно ГОСТ 28075. Предварительно высушенные, измельченные и просеянные образцы кормов массой по 5 г помещались в синтетические мешочки с размером 20 10 см. Завязанные капроновой ниткой мешочки погружались в рубец через фистулу во время утреннего кормления животных. Образцы корма, помещенные в мешочки, инкубировали в течение 3, 6, 9, 12, 24 и 48 часов. Количество СП концентрированных кормов, не распадавшихся после 24 часов инкубации, принимали за недоступную часть СП корма, а для грубых кормов – после 24 часов инкубации в рубце (Ors- kov E.R., 1979).
Для расчёта относительной РП за основу принимали инкубацию концентрированных кормов в течение 6 часов и грубых – 24 часов. Мешочки с кормами после инкубации тщательно промывались в проточной воде и высушивали до воздушно-сухого состояния. По разнице массы пробы корма до и после инкубации в рубце определя-
ли распадаемость сухого вещества. В кормах до и после инкубации определяли содержание СП и рассчитывали РП , по следующей формуле:
МСП
МСП о 1
100 %
РП
МСП
0
где МСП0 – масса сырого протеина до инкубации, г;
МСП1 – масса сырого протеина после инкубации, г. Отдельные виды корма инкубировали каждому животному в трех параллельных мешочках. Содержание сырого протеина в кормах определяли по содержанию общего азота методом Къельдаля на аппарате Сиреньева по общепринятой методике (Кури-лов Н.В, Севастьянова Н.А., Материкин А.М., 1987). По разнице содержания общего азота, сухих веществ в кормах до и после инкубации в рубце находили показатели РП и СВ .
Растворимость протеина определяли путём инкубации измельченных кормов в буферном растворе Мак-Доугала в течение 1 часа при температуре 40о С. Затем в фильтрате определяли содержание азота по Къельдалю и по разнице общего содержания азота до и после инкубации в буферных растворах рассчитывали растворимость протеина кормов (Турчинский В.В. и др., 1987).
Эффективную распадаемость протеина корма рассчитывали с помощью уравнения Ерскова-Мак-Дональда (Orskov E.R., McDonald J.I., 1979):
ВС
Р А
С К
где А – растворимая часть СП; В – распадаемая часть СП;
С – скорость распада;
К – скорость оттока кормовых частиц из рубца.
В исследуемых концентрированных кормах до и после 6- и 12часовой инкубации и в объёмистых кормах после 24 часовой инкубации в рубце определяли аминокислотный состав нераспавшегося в рубце протеина.
Для определения переваримости в кишечнике нераспавшегося в рубце протеина отдельных кормов использовали метод мобильных мешочков (Voigt J., Piatkowsky B., Engelmann М., et. al., 1985). В ка-
