Для приготовления раствора метиленового голубого с массовой концентрацией метиленового голубого 0,00015 г/см3 берут 6 см3 раствора с массовой концентрацией 0,005 г/см3 и смешивают со 194 см3 дистиллированной воды. Срок хранения приготовленного раствора не более 30 сут в холодильнике.
Проведение анализа
В стерильную пробирку пипеткой отмеряют 1 см3 рабочего раствора метиленового голубого и 20 см3 исследуемого молока, закрывают резиновой пробкой, размешивают путем трехкратного переворачивания пробирки и ставят в редуктазник с температурой 37±1 °С (при его отсутствии можно использовать водяную баню для жиромеров). Уровень воды в водяной бане должен быть выше уровня молока в пробирках; пробирки предохранять от воздействия света. При постановке пробирок в баню заметить время и затем наблюдать за обесцвечиванием их содержимого через 40 мин, 2,5 и 3,5 ч. По табл. 8 оценить качество молока и определить класс, к которому оно относится по бактериальной загрязненности. Окончанием анализа следует считать момент обесцвечивания окраски молока. Остающийся небольшой кольцеобразный окрашенный слой вверху (шириной не более 1 см) или небольшая окрашенная часть внизу пробирки (шириной не более 1 см) в расчет не принимается. Появление окрашивания молока в этих пробирках при встряхивании не учитывают.
Определение редуктазы с помощью резазурина
Метод основан на восстановлении резазурина окислительновосстановительными ферментами, выделяемыми в молоко микроорганизмами. По продолжительности изменения окраски резазурина оценивают бактериальную обсемененность молока. Пробу с резазурином следует проводить не ранее, чем через 2 ч после доения.
Приготовление раствора резазурина . Взять 100 мг резазурина и растворить в 200 см3 прокипяченной, охлажденной до 25±2 °С дистиллированной воды. Срок хранения основного раствора в посуде из темного стекла не более 30 сут при температуре 8–10 °С. Из основного раствора готовят рабочий. Для приготовления рабочего раствора основной раствор разбавляют прокипяченной охлажденной дистиллированной водой при температуре 25±2 °С в соотношении 1:2,5 (к 10 см3 основного раствора прибавить 25 см3 воды). Содержание резазурина в рабочем растворе 0,014 %. Срок хранения
рабочего раствора в холодильнике в посуде из темного стекла – не более 3 сут.
Проведение анализа
В стерильную пробирку отмеряют пипеткой 1 см3 рабочего раствора резазурина и 10 см3 молока. Закрыть пробирку резиновой стерильной пробкой, перемешать, медленно переворачивая ее 3 раза, размешать содержимое и поставить в редуктазник (водяную баню) при температуре 37±1 °С. Уровень воды в редуктазнике после погружения пробирки должен быть несколько выше уровня жидкости в пробирке (предохранять пробирки от прямых солнечных лучей). Время погружения пробирки в редуктазник (водяную баню) следует считать началом анализа. Показания снимают через 1 и 1,5 ч. Появление окрашивания молока в пробирке при встряхивании не учитывают. По истечении 1 ч пробирки вынимают из редуктазника. Пробирки с молоком, имеющие серо-сиреневую окраску до сиреневой со слабым серым оттенком, оставляют в редуктазнике еще на 30 мин.
Пользуясь табл. 14, определить качество молока и установить его класс.
Таблица 14
Определение числа бактерий в молоке и установление его класса
| Продолжитель- ность изменения цвета | Окраска молока | Число бактерий в 1 мл молока | Класс |
|---|---|---|---|
| Через 1,5 ч | Серо-сиреневая до сиреневой со сла- бым серым оттен- ком | До 300 тыс. | Выс- ший |
| Через 1 ч | Серо-сиреневая до сиреневой со сла- бым серым оттен- ком | От 300 тыс. до 500 тыс. | I |
| Через 1 ч | Сиреневая с розо- вым оттенком или ярко-розовая | От 500 тыс. до 4 млн | II |
| Через 1 ч | Бледно-розовая или белая | От 4 млн до 20 млн | III |
Для более точного определения общего количества бактерий проводят микробиологические исследования. Метод основан на способности мезофильных и аэробных микроорганизмов размножаться на плотном питательном агаре при 30±1 °С в течение 72 ч. Для этого производится посев исследуемого продукта в бактериологические чашки Петри.
Соматические клетки – это клетки тканей и органов животного. В частности, из них состоят и ткани молочных проходов и альвеол, участвующих в секреции молока. В вымени происходит постоянное обновление клеток эпителиальной ткани. Старые клетки отмирают и отторгаются (выделяются вместе с молоком).
Кроме того, в молоке имеются защитные клетки из крови (лейкоциты – белые кровяные тельца), которые организм мобилизует для защиты от возбудителей болезни, проникших в вымя.
Соматические клетки постоянно присутствуют в молоке. у основной массы здоровых животных их количество не превышает 200–300 тыс./см3 .
Производители молока на фермах ошибочно полагают, что, удалив из молока большую часть соматических клеток механическим путем (с помощью фильтрации и сепаратора), можно повысить качество производимого продукта. Однако это не так, ведь соматические клетки являются не причиной заболевания (мастита) животных, а его следствием. Соответственно, удаляя таким способом соматические клетки, производители молока маскируют некачественное, а иногда и опасное для здоровья человека молоко под молоко хорошего качества.
Содержание соматических клеток подвержено колебаниям (табл. 15) в зависимости от сезона года [1].
Содержание соматических клеток в молоке зависит от следующих факторов:
– наследственная предрасположенность (порода, семейство коровы, линия быка). В ряде стран (Швеция, Дания, Германия и др.) проводится оценка племенной ценности коров и быковпроизводителей по содержанию соматических клеток. Это важное условие для селекционного улучшения стада и повышения устойчивости вымени к заболеванию;
– стадия лактации : на первых и последних неделях лактации, а также на последних неделях стельности животные подвержены заболеванию вымени;
Содержание соматических клеток в молоке здоровых лактирующих коров
в зависимости от сезона года
| Количество соматических клеток, тыс/см3 | Процент поголовья стада | ||||
|---|---|---|---|---|---|
| Зима | Весна | Лето | Осень | Удельное чис- ло животных стада, % | |
| 100 | 2,9 | 4,06 | 14,3 | 8,1 | 7,1 |
| 150 | 10,8 | 20,6 | 39,5 | 29,7 | 24,8 |
| 200 | 28,1 | 31,7 | 41,2 | 37,1 | 34,4 |
| 250 | 30,9 | 24,6 | 30,4 | 10,1 | 17,5 |
| 300 | 15,8 | 14,3 | 0,8 | 8,1 | 10,0 |
| 350 | 7,2 | 2,4 | 0,8 | 4,7 | 3,9 |
| 400 | 2,9 | 1,6 | 0 | 2,2 | 1,5 |
| 450 | 1,4 | 0,8 | 0 | 0 | 0,6 |
| 500 | 0,7 | 0 | 0 | 0 | 0,2 |
– форма вымени : животные с малопригодным к доению выменем (неправильная форма, так называемое «козье вымя»), плохо выдаиваются, чаще болеют маститом. Низкое расположение вымени повышает опасность повреждения и проникновения инфекции;
– нарушенный обмен веществ: некоторые животные, имея напряженный обмен веществ и сниженную иммунную защиту, быстрее реагируют на нарушения извне повышением содержания соматических клеток (стресс-чувствительность);.
– пора года: самый высокий уровень соматических клеток регистрируется, например, в Германии, в летний период;
– ошибки при доении: неправильное надевание доильных аппаратов, слишком продолжительный период доения и отсутствие контроля за выдаиванием способствуют возникновению болезней вымени;
– несовершенство и дефекты доильного оборудования: слишком высокий или низкий уровень вакуума, колебания вакуума, высокая или малая частота пульсаций, изношенная сосковая резина вызывают раздражение вымени;
– недостаточная гигиена: антисанитария в коровнике, несоблюдение правил санитарного ухода за выменем и/или доильным оборудованием, грязные руки дояра, ранки или иные механические
повреждения рук, отсутствие дезинфекции повышают бакобсемененность и риск инфицирования;
– погрешности содержания: острые края ограждающих решеток, гладкая или неровная поверхность пола могут привести к травмированию вымени и сосков, повышая риск заражения;
– ошибки в кормлении: недостаточное обеспечение энергией, дефицит сырой клетчатки с последующим проявлением кетоза и ацидоза, недостаток витаминов и микроэлементов (в первую очередь, селена) ослабляют сопротивляемость организма инфекциям.
В табл. 16 показано, в какой степени стадия лактации и состояние здоровья животного влияют на количество соматических клеток в молоке.
Таблица 16
Содержание соматических клеток в молоке в зависимости от стадии лактации
| Период лактации | Содержание соматических клеток в 1 см3 молока | При патологии | Содержание соматических клеток в 1 см3 молока |
|---|---|---|---|
| Молозивный | 6,54–1,0 млн | Эндометриты | 1,5–2,0 млн |
| 1-я неделя | 640 тыс. | Задержание последа | 1,1–1,8 млн |
| 2-я неделя | 100 тыс. | Раздражение вымени | 1,0–1,3 млн |
| 3-я неделя | 70 тыс. | Субклинический мастит | 1,0–2,5 млн |
| 2–8 месяцев | 150–300 тыс. | Клинический мастит | 5,0–40,0 млн |
| Стародойность и запуск | 1,5–2,5 млн | Хронический мастит | 2,0–2,5 млн |
В первые недели после отела и в предзапускной период содержание соматических клеток в молоке животных всегда повышенное. Различные болезни, в том числе мастит, являются одной из причин повышения уровня соматических клеток. При нарушении здоровья вымени коров их уровень в молоке резко возрастает. В то же время, наряду с маститом и другие болезни (эндометрит, задержание) также вызывают повышение содержания соматических клеток в молоке [1].
Приведенные данные необходимо учитывать при определении источника повышенного уровня соматических клеток и назначении соответствующего лечения.
Примесь маститного молока ухудшает состав и технологические свойства перерабатываемого молока (табл. 17).
Таблица 17
Изменение состава и свойств анормального молока
| Количество соматических | Процент снижения в молоке | |||
|---|---|---|---|---|
| клеток, млн/см3 | титруемой кислотности | жира | лактозы | казеина |
| 0,6–1,0 | 9,0 | 0,38 | 0,33 | 0,13 |
| 2,3–3,8 | 16,5 | 0,35 | 0,40 | 0,24 |
| 4,0–13,0 | 21,0 | 0,51 | 0,50 | 0,27 |
Оно становится менее термоустойчивым, хуже свертывается сычужным ферментом, развитие полезных молочнокислых бактерий замедляется.
Такое молоко будет, во-первых, лишено ценных биологических свойств, во-вторых, ухудшаются технологические свойства при переработке, в-третьих, снижается качество молочных продуктов. Вырабатываемые из такого молока продукты (сыр, творог, масло, кефир и др.) не смогут быть хорошего качества. Но самое главное – это невидимые потери от снижения продуктивности животных, их долголетия, атрофий четвертей вымени.
От количества соматических клеток зависит сортность молока. Поэтому предприятия молочной промышленности проводят контроль примеси маститного молока.
Содержание соматических клеток для молока сорта «экстра» должно быть не более 300 тыс./см3 , для высшего сорта – не более 400 тыс./см3 , для первого – 500 тыс./см3 .
Определение количества соматических клеток в молоке визуальным способом. Метод основан на изменении консистенции молока при взаимодействии с реактивом в зависимости от количества соматических клеток.
