считают положительной, от 3 до 4 — сомнительной, менее 3 см3 — отрицательной.
Следует отметить, что количество каталазы в молоке увеличивается не только при воспалении вымени, но и в молоке здоровых коров (в первые 5 дней после отела, в период запуска и даже в середине лактационного периода). Каталазная проба становится резко положительной при наличии в молоке эритроцитов, что в большинстве случаев не является признаком мастита. Иногда каталазная проба дает положительную реакцию без заметного увеличения количества клеток в молоке.
Таким образом, по объему выделившегося кислорода трудно судить о количестве клеток в 1 мл молока и наличии лейкоцитов или эритроцитов. Методика каталазной пробы сложна, требует много времени, а поэтому неприменима в практических условиях.
Фёльген-проба на ДНК.
В пробирку к 2 мл молока добавляют 2 мл 2н HCl и ставят в водяную баню при температуре 60° на 24 минуты. Затем добавляют 4 мл реактива Шиффа и оставляют на 30 минут при комнатной температуре. Появление интенсивно сиреневого цвета указывает на наличие ДНК (положительная реакция).
Титрация лизоцима М. Отсутствие лизоцима М не является прямым признаком воспаления молочной железы, но при наличии мастита лизоцим М в основном отсутствует. Поэтому титрация лизоцима М в молоке отдельных долей вымени служит дополнительным методом диагностики маститов.
Молоко исследуют на наличие и концентрацию лизоцима М путем чашечной титрации на агаре с луночками (по В. И. Мутовину).
В качестве питательной среды берут мясопептонный агар (МПА), рН которого 7,2. Наливают его в чашки Петри слоем 2,5—-3 мм. Затем среду подсушивают, выдерживая при температуре 2—6° в течение 18—24 часов, после чего
используют для титрации в течение пяти дней при условии хранения в холодильнике.
Для получения фона при титрации лизоцима М используют культуру золотистого стафилококка штамм ВМ. Получают его во Всероссийском научно-исследовательском институте ветеринарной санитарии.
Суточную бульонную культуру этого штамма разводят физиологическим раствором 1 : 10 000 и вносят по 0,25 мл в каждую чашку для титрации, тщательно распределяя по всей поверхности среды. После нанесения фона чашки оставляют при комнатной температуре на 30—40 минут, затем в агаровых пластинках стерильной тонкостенной стальной трубкой диаметром 10 мм делают луночки (кольца), В одной чашке Петри можно разместить 4—7 луночек. В каждую луночку вносят по 2 капли испытуемого молока, выдерживают 18 часов при комнатной температуре (22—23°) и 5—6 часов в термостате при 37°, а затем учитывают результаты титрации молока.
Обычный рост культуры фона непосредственно в луночке, в которую внесен испытуемый материал, обозначают знаком О, что свидетельствует об отсутствии в исследуемом материале титруемых количеств лизоцима М.
При росте культуры около луночек значительно слабее густоты культуры фона, находящейся в удалении от луночек, то результат обозначают термином ЗУР (зона угнетенного роста). При наличии зоны угнетенного роста диаметром более 14 мм перед знаком ЗУР отмечают величину диаметра зоны угнетенного роста. Если ЗУР имеет диаметр 14 мм и менее, то результат обозначают термином СЛ (следы).
Если в испытуемом молоке достаточных концентраций лизоцимов вокруг соответствующих луночек видны кольцеобразные зоны задержки роста (ЗЗР), свободные от колоний тесткультуры. Степень активности лизоцима М учитывают по величине диаметра (мм) кольца зоны задержки роста.
После первичного учета судят о бактериостатической активности лизоцима М. Для получения результатов о бактерицидных свойствах лизоцима чашки для титрации после
первичного учета вновь помещают в термостат при 37° до следующего дня, после чего учитывают бактерицидное действие лизоцима по диаметру оставшихся зон задержки роста. При положительной реакции на любую из проб молоко от этого животного кипятят и уничтожают.
