цитарных антигенов, являются стандартом для проверки наличия антител в испытуемой сыворотке.
Подбор доноров и реципиентов. При изоиммунизациях, преследующих цель получение сывороток с определенными иммунными антителами, большое значение имеет правильный подбор доноров и реципиентов. В качестве доноров выбираются животные, имеющие эритроциты с теми антигенами, на которые требуется выработать соответствующие антисыворотки. Такие животные выявляются уже при «слепых» иммунизациях, когда антигенный состав доноров и реципиентов неизвестен. Однако более эффективным путем получения реагентов является плановая иммунизация, при которой антигенная характеристика доноров и реципиентов известна.
Группа доноров должна иметь антигены, против которых планируется выработать антитела у реципиентов. Как показали наши исследования, многие реципиенты зачастую оказывались иммунологически ареактивными: изоиммунизация их эритроцитами не обеспечивала образования антител. Поэтому желательно иметь доноров — дублеров с соответствующей группой реципиентов, для повышения вероятности получения необходимых антител.
Число реципиентов определяется количеством искомых антител, причем получаемые иммунные «сырые» сыворотки не должны быть очень сложными, то есть содержать различные антитела. С другой стороны, поскольку значительная часть реципиентов оказывается иммунологически ареактивной и не образует искомых антител, то к каждому донору необходимо прикреплять не одного, а несколько реципиентов. Обычно при подборе пар донор-реципиент у овец учитывается разница на 1-3 антигенных фактора. Следует отметить, что одни эритроцитарные факторы (Aa, AB, Bd и Da) у
овец имеют большую антигенную активность, другие (Bi, Ве, Ma, Cb) — меньшую. Если донор имеет на один антиген больше реципиента, то сыворотка реципиента может оказаться готовым реагентом (таблица 2).
Таблица 2 Подбор доноров и реципиентов для направленной изоиммунизации овец
| Животные | | Номе р | Антигены групп крови | Ожидаемые антитела |
|---|---|---|---|
| Донор оно | 83 | Aa, , Bb, Bb, Bg, Bg, Bf, BI, Be, Be, Ca. Са, Da | |
| Реципиент | 136 | Aa, Bb, Bg, 8Da Bf, Bi, Ca, | |
| Реципиент ™ | 187 | В, И Ab, Bg, Bf, Be, Bi. Ca, Ma | Aa, Bb ) |
| Донор | 61 | В, » Aa, Aa, Bb, DD, Bg, bg, Bi, bi, Ca ба, Da, O, Ma | |
| Реципиент | 190 | Ab, 10, Bb, Bg, BE, Be, BE, Bh, Ра, Ca Da, O | Aa, Bi, . Ma |
| Реципиент ™ | 194 | Aa, и’? Bb, Be, Bf, Ca, Da. O, Ma | Bg, 5, Bi . |
Сопоставленные типы крови животных показывают, что в первой из них реципиент не содержит фактора Ве, Aa, Bb, а во второй - Aa, Bi, Bg, Ма, следовательно, можно предположить, что первые реципиенты будут продуцировать- анти — Be, Aa, Bb, вторые анти — Aa, Bi, Bg и Ма.
По результатам такого анализа составляется план иммунизации. В плане необходимо предусмотреть, чтобы антитела к одному и тому же антигену вырабатывались несколькими реципиентами, исходя из того, что не у всех однии те же
факторы обладают одинаковой антигенностью. До начала иммунизации все подобранные пары должны быть проверены перекрестной реакцией гемолиза. При этом реципиентов, с реакцией на анти — R не следует включать в план иммунизации, так как естественное антитело анти — R очень трудно удаляется абсорбцией и часто мешает при получении ряда антисывороток.
Иммунизация животных. Для проведения иммунизаций у доноров берется кровь из яремной вены во флаконы, с консервантом в соотношении 4:1. Консервированная кровь может храниться в холодильнике при температуре +1°C до четырех недель, что позволяет ее использовать для нескольких последовательных иммунизаций. Иммунизация производится внутримышечно. В бедро животного вначале вводят иглу, а затем присоединяют шприц, наполненный цельной кровью. При каждой инъекции вводят 10 мл цельной крови. Инъекции производят четырехкратно в течение месяца, один раз в неделю, а иногда — 6-8 раз. Перед каждой инъекцией, начиная с третьей, у реципиента берут кровь для проверки нарастания титра образовавшихся антител. Установлено, что рост титра антител зависит от индивидуальных особенностей реципиентов. Часть из них реагирует сразу после первого введения крови, другие — лишь после третьего или четвертого (таблица 3).
Следует отметить, что, как правило, часть животных (4050 %) не реагирует на иммунизаторное воздействие первого цикла. Это зависит от комбинации аллелей в отдельных локусах и генотипов групп крови. Кроме того одни факторы у тонкорунных овец (Aa, Ав, BB, Da) имеют большую антигенную активность, другие (Bg, Be, Ma, Cb) - меньшую. Это объясняется разной силой антигенности эритроцитарных детерминант или их различным взаимодействием на поверхно-
