на 3 или 4 равные по объему части (в зависимости от количества абсорбций). Одну часть смешивают с равным или лучше несколько меньшим количеством сыворотки и оставляют на 45 минут при комнатной температуре, через каждые 10 мин осторожно перемешивая смесь, затем центрифугируют ее до полного отделения от эритроцитов. Смешивают с сывороткой вторую порцию подготовленных эритроцитов и проводят второй этап абсорбции, затем заключительный, который отличается только тем, что после инкубации сыворотку переносят на 30 мин в холодильник для абсорбции при +4°C.
Если «сырую» сыворотку абсорбируют смесью эритроцитов двух животных (для одновременного удаления нескольких антител), то необходимо брать эритроциты от каждого животного в отношении к объему сыворотки не менее 1:1. Полученный реагент тщательно проверяют на чистоту путем контрольной конфронтации с большой панелью — 80-100 животных, с хорошо известным антигенным составом эритроцитов. Полученные результаты должны подтвердить специфичность антисыворотки в отношении к определенному кровяному фактору. Только таким образом проверенную антисыворотку готовят в большом объеме, включают в набор антисывороток и используют для определения групп крови.
Рабочий титр реагентов должен быть не ниже 1:4, каждый реагент проверяется на специфичность по параллельным реакциям с ранее испытанными эталонными образцами, прошедшими международные, региональные сверки. Периодически (1 раз в 2 года) иммуноспецифичность всего набора реагентов должна подтверждаться сверками различного уровня.
На флаконы с изготовленными сыворотками наклеиваются этикетки, с указанием места изготовления реагента, его
наименование (анти-Вв, анти-Ра и т.д.), титр, номер серии, время изготовления, условия хранения.
Решением международной конференции в Жуи-анЖозасе (Франция, 1973) установлены требования к сывороткам. Реагенты для овец должны быть:
а) изоиммунными (за исключением реагентов В системы);
6) специфичными (реагировать только с определенным антигеном);
в) авидными (способностью быстрее или медленнее соединяться с антигеном);
г) реагировать при температурном оптимуме своего действия;
д) высокотитражными (титр, который представляет собой наибольшее разведение сыворотки, содержащей антитела, при котором проявляется их действие);
Сыворотка — реагент должна храниться в не разведенном виде, в холодильнике при — 18-20°C, в количестве необходимом для тестирования не менее 3000 образцов крови.
2. Наследственно обусловленные полиморфные системы белков и ферментов крови овец
Открытие новых высокоэффективных методов электрофоретического разделения белков и ферментов способствовало бурному росту молекулярной генетики.
Если до недавнего времени основные закономерности изменчивости и наследуемости изучались практически только на основе морфологических признаков, с помощью которых и были открыты законы Менделя и закон гомологических рядов Н.И. Вавилова, то в настоящее время стало оче-
видным недостаточность, такой информации, особенно для генетики сельскохозяйственных животных.
Известно, что основные хозяйственно-полезные признаки являются полигенными и сильно варьируют как в онтогенезе, так и под влиянием условий среды. Поэтому селекционеру для определения генотипа требуется многократная оценка селекционнируемых признаков. Особенно затруднительно получение информации о генотипе на первых этапах селекционного процесса.
Вместе с тем, селекция остро нуждается в методах, по которым можно было бы сравнить генетическую структуру различных групп животных и следить за ее динамикой в процессе селекционного воздействия, породообразования.
Поиски четко исследуемых генетических маркеров привели исследователей к изучению белков и ферментов. Белки — продукты экспрессии генов, по ним можно судить об организации и функционировании генома. Изучение биохимического полиморфизма белков и ферментов дает незаменимую информацию о сопряженности различного аллельного состояния генов или их кластеров с продуктивными признаками.
Множественность форм белков и ферментов возникает в силу ряда причин, которые К. Райдери К. Тейлор (1987) разделяют на две категории. К первой относятся причины генетического, или первичного уровня (множественные гены кодируют свою субъединицу белка или фермента), ко второй категории относятся причины посттрансляционного, или вторичного уровня. В этом случае различия между субъединицами, кодируемыми одним геном, возникают из-за различных модификаций исходных гомогенных субъединиц.
Знание наследственно обусловленного биохимического полиморфизма необходимо для разработки методов отбора и подбора ценных генотипов идентификации пород жи-
