Иммуногенетика в селекции овец

• бактериологические пробирки со штативами для приготовления суспензии эритроцитов из крови панельных животных, а также для отбора проб крови у исследуемых животных;

• пастеровские, лабораторные пипетки объемом на 1, 2, 5,

• 10 мл;

• полиэтиленовые сосуды емкостью от 100 мл до 1 литра

• для отбора крови и хранения сыворотки;

• шприцы для иммунизации;

• иглы для взятия крови;

• шкафы для стерилизации стеклянной посуды при тем-

• пературе 120°С;

• аппараты для дистилляции воды;

• центрифуги со скоростью вращения не менее 4000

• об/мин;

• вакуумные и водоструйные насосы для отсасывания сы-

• воротки или надосадочной жидкости;

• низкотемпературные холодильники с температурным

• режимом в пределах- 15-20°С;

• холодильники с температурным режимом +2, +4°C;

• весы для взвешивания реактивов;

• реактивы для изготовления изотонического и антикоа-

• гулирующего растворов (хлористый натрий, 3-х замещенный лимоннокислый натрий, глюкоза, реванол, альбуцид);

• бланки протоколов и карточек.

• Для определения эритроцитарного антигенного состава

• крови животных донорского стада из яремной вены берут по 10-15 мл крови в хорошо закрывающиеся пробирки, в кото-

• рые, в целях предотвращения свертывания крови, заранее вносится консервант из расчета 1/4 - 1/5 объема крови.

Состав консерванта:

После добавления крови содержимое пробирок тщательно перемешивают. Кровь, не позднее двух суток со времени забора, доставляют в лабораторию либо в специальных холодильниках (автохолодильники), либо в термосах со смесью льда и поваренной соли в пропорции 3:1, для поддержания температуры непосредственно вблизи образцов крови не ниже +4 С, образцы отделяют от смеси прокладками из паралона толщинойв 3-4 см.

Каждая проба крови должна иметь этикетку с указанием номера животного, все необходимые сведения о котором заносят перед взятием проб крови в ведомость.

В лаборатории из полученной крови готовят 2,5 % суспензию эритроцитов и определяют антигенный состав использованием гемолитического теста (реакция гемолиза и агглютинации).

Суспензию эритроцитов получают путем центрифугирования крови в течение 10 мин при 3000 об/мин. Отделившуюся плазму отсасывают пипеткой, с помощью вакуумного насоса. К осадку доливают изотонический раствор (0,9 % раствор хлористого натрия), встряхивают, снова центрифугируют, эту процедуру повторяют трижды.

В пробирку, содержащую 9,75 мл изотонического раствора, вносят 0,25 мл трижды отмытых эритроцитов, тщательно

перемешивают. 2,5 % суспензию эритроцитов можно хранить в течение 4-5 дней при температуре +4°C.

Реакция гемолиза проводится по A.Neimann-Sorensen (1957) в модификации F.Zur (1977): в лунки пластмассовых блоков из специального оргстекла вносят 2 капли соответствующей сыворотки, одну каплю 2,5 % суспензии эритроцитов и одну каплю комплемента. Смесь встряхивают и помещают в термостат при температуре +30+2°C. Читка реакции проводится трижды: через 30 мин, 2 и 4 часа с момента внесения комплемента. Степень гемолиза определяют по бальной системе:

• 4 балла — все эритроциты гемолизированы, жидкость рав-

• номерно окрашена, прозрачна;

• 3 балла — на дне видны единичные эритроциты, образует-

• ся легкое помутнение при взбалтывании;

• 2 балла —1/2 часть эритроцитов на дне лунки, жидкость

• над осадком умеренно окрашена;

1 балл — около 3/4 частей эритроцитов на дне лунки, жидкость над осадком слабо красного цвета;

• • все эритроциты на дне лунки, над осадком жидкость слегка красная, следы гемолиза заметны в виде ободка над осевшими эритроцитами;

О — все эритроциты целые, надосадочная жидкость прозрачная.

Комплемент является основной частью в реакции гемолиза. В качестве комплемента используется натуральная кроличья сыворотка с добавлением лиофилизированной сыворотки морской свинки в соотношении 25:4. Комплемент получают из крови кроликов при забое. Кровь инкубируют при температуре +30° С в термостате в течение двух часов. От образовавшегося сгустка сыворотку отделяют центрифугированием.