Консерванты крови
Образцы крови для определения эритроцитарных антигенов необходимо консервировать антикоагуляционным растворам (антикоагулянтом).
| Прописи антииоагулянтов | ||
|---|---|---|
| I. | Лимоннокислый натрий трехзамещенный | 32.0 г |
| Глюкоза | 1 0 . 0 г | |
| Альбуцид | 5.0 г | |
| Риванол | 0,04 г | |
| Дистиллированная вода | до 1 0 0 0 мл | |
| II. | Цитрат натрия | 38.0 г |
| Лимонная кислота | 3,6 г | |
| Глюкоза | 37.0 г | |
| Стрептомицин безводный | 2,4 г | |
| Дистиллированная вода | ДО 1 0 0 0 мл | |
| III. | Цитрат натрия | 32.0 г |
| Глюкоза | 1 0 . 0 г | |
|---|---|---|
| Алестен (сульфоацетамид) | 5.0 г | |
| Риванол | 0,04 г | |
| Дистиллированная вода | до 1 0 0 0 мл | |
| (можно довести pH раствора до 5,6 с помо | ||
| щью 1 0 %-ной лимонной кислоты) | ||
| IV. | Трехзамещенный лимоннокислый натрий | 50.0 г |
| Глюкоза | 1 0 . 0 г | |
|---|---|---|
| Стрептомицин | 1 . 0 г | |
| Дистиллированная вода | до 1 0 0 0 мл |
Техника приготовления антикоагуляционных растворов
На аналитических весах делают навески всех ингредиентов.
В мерную колбу на 1000 мл вносят: навески лимоннокислого натрия и глюкозы, 300-400 мл кипяченой дистиллированной воды, температуру раствора доводят до температуры 36-37°С, вносят навески альбуцида и риванола, доводят объем раствора до метки 1000 мл дистиллированной водой при температуре 36-37°С, смесь перемешивают и фильтруют через ватно-бумажный фильтр.
Раствор хранится в холодильнике при температуре 4°С в течение 1-1,5 месяцев.
Реактивы
1 . Глюкоза кристаллическая гидратная ГОСТ 975-75 2. Хлористый натрий по 0,9 г в таблетках ГОСТ 4233-77 3. Лимоннокислый натрий трехзамещенГОСТ 22280-76 ный 4. Риванол (этакридин лактат) ГФ, X СТ27 5. Альбуцид (сульфацил натрия) ГФ, X СТ641 6 . Левомицетин ГФ, X СТ371 7. Спирт ректификат 8 . Кислота серная техническая удельным 1,82-1,84 весом 9. Двуххромовокислый калий (К 2 СЮ 7) ГОСТ 4220-75 10. Сода кальцинированная ГОСТ 83-79
1.2. Правила получения и хранения образцов крови
Пробы крови для генетической экспертизы у крупного рогатого скота берут из яремной вены по общепринятой методике специалисты ветеринарной службы хозяйства в присутствии зоотехникаселекционера.
Получение образцов крови
Образцы крови берут в стерильные пробирки.
Перед взятием крови пробирки номеруют и вносят в них по 3-6 мл антикоагулянта и расставляют в штатив;
осторожно по стенке пробирки приливают кровь в объеме 1 - 2 мл (соотношение антикоагулянта и крови 3:1);
пробирку закрывают пробкой и несколько раз переворачивают для перемешивания содержимого;
в ведомость взятия крови сразу записывают индивидуальный номер животного, у которого взята кровь.
Доставка и хранение образцов крови
Образцы крови помещают в сумку-холодильник или термос при температуре 2-4°С и направляют в лабораторию в течение 1-2 суток со дня взятия крови.
К образцам крови прилагается ведомость с указанием даты взятия крови, клички, индивидуального номера животного, возраста, породы, родителей. Образцы крови хранят в холодильнике при температуре 2-4°С не более 1-2 недель.
1.3. Метод и правила определения антигенного спектра эритроцитов
Антигенный состав крови крупного рогатого скота определяют по результатам постановки серологических реакций с помощью моноспецифических сывороток реагентов.
Сущность реакции состоит в том, что антитела, содержащиеся в сыворотках-реагентах, соединяются с гомологичными антигенами эритроцитов крови исследуемого животного. Соединение антигена с антителом в присутствии комплемента (нормальной кроличьей сыворотки) вызывает разрушение оболочек эритроцитов (гемолиз) и освобождение гемоглобина, который окрашивает жидкость в красноватый («лаковый»). При отсутствии антигена реакция не происходит, эритроциты остаются неповрежденными и оседают на дно.
Подготовка материалов для постановки реакции гемолиза
Перед проведением иммунологической реакции необходимо подготовить к работе реагенты, суспензии эритроцитов, серологические тесты, штативы с пробирками и т.д.
Подготовка реагентов
-
Для размораживания реагенты переносят в лабораторное помещение с комнатной температурой. Для ускорения процесса флаконы можно поставить в теплую воду с температурой не выше 36 — 37°С.
-
Готовят рабочие титры в соответствии с маркировкой на флаконах. Сыворотки разбавляют физиологическим раствором на одну-две ступени ниже их предельного тира, указанного на флаконе. Например, если реагент имеет титр 1:32, то для работы его надо разбавить не более, чем в 16 раз.
Реагенты с рабочим титром должны быть использованы в течение одного дня. Неиспользованные реагенты замораживают, затем используют в течение ближайших двух-трех дней.
