- 185 - YK 636.1.082. 453.53 . В.А.Науменкова,В.В.Андрюшин, кандидат ветеринарных7 наук, ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ДИАЛИЗА т аи СР ЖЕРЕБЦА прочноИскусственноевошло в практикуосеменениеживотноводства.замороженно-оттаяннойСравнительноспермдавн о йразработен и внедрен в производство метод замораживания спермы херебцов. Однако масштабы применения криоконсервированной спермыно жеши р ебцовокое внедрениепродолжаютметодост а ватьсяв производствостабильно обусловленонизкими. Недоне с таточ-кольger se проведениВо-п е рвых,работelleпо великиискусственномузатраты труда,осеменениювременкр и окорси ср е дстврвировн а н- нойв большихспермой.Во-вторых,размерахустойчивостьи BO многомк за мораживаниювисит OT индивидуальныхспермиев варьируособ е тнностей жеребцов. В результате оплодотворяемость спермы может колн е батьсявыдерживаютот 10 %зам д о 80раживания.%. Спермии отдельных жеребцов совершенно В-третьих, крупногабаритный пакетный способ расфасовки разовых доз спермы не позволяет использовать современные экономичные сосуды Дьюара. В связи с этим продолжают оставаться актуальными задачи как по изысканию путей снижающих криопотери спермиев, так и по сгущению спермы для заморозки в малых объемах без заметного снижения оплодотворяющей способности. Необходимо отметить, что работы по уменьшению объема замораживаемой разовой дозы спермы в лаборатории велись ранее в двух вариантах. В первом варианте сперму сгущали центрифугированием. Качество замороженно-оттаянной центрифугированной спермы не отличалось стабильностью. При центрифугировании спермы некоторых жеребцов получался рыхлый осадок, наблюдалось много спермиев с манежными движениями. Во-втором варианте изучали возможности снизить кратность разбавления спермы до 1:1 за счет подбора соот< ветствующей среды и тем самым снизить объем замороженной дозы.Ho
- 186 -
. } подобрать в опытах подходящую среду не удалось. Не получили достаточной густоты сперму и при фракционном методе взятия эякулятов.
Одним из методов, позволяющим получить в объеме 4-5 мл достаточное количество спермиев для плодотворного осеменения, может служить диализный способ обработки спермы. При диализе, становится не обязательным элемент разбавления спермы в неск ко раз защитными средами на основе водного растворителя. Возн хает возможность в I мл замороженной спермы иметь в четыре рай больше спермиев, нежели в разбавленной криопротектором. В так случае по концентрации спермиев диализная сперма может у i лишь сгущенной центрифугированием. В то же время процесс цен: трифугирования является небезопасным для спермиев (Amann Pickett , 1987). Исходя из перечисленных предлосылок мы решие ли изучить пути диализной обработки спермы перед замораживани Этот метод использовался многими исследователями для продления жизни спермиев при комнатной температуре (Хронопуло Н.П. 1940$ Ван-Демарк, 1958; Бамба и др., 1979). Кононов В.П. и др. (1987) применил диализ при обработке спермы хряка для замораживания. | Были достигнуты определенные успехи. левичВА.Н.нашейи лабораторииЖмурин Л.М. метод(1958-1960)диализас цельюиспользовалиудаленияБуйко-Рог:больших | количеств глицерина из разбавленного семени. ) Сперму от жеребцов получали на искусственную вагину. Опрея деляли объем эякулата, подвижность спермиев в баллах, концен ар циюнию по стандарту Паршутина и Румянцевой. В опытах no определере Горяева.концентрации спермы после диализа подсчет проводили в каме| В качестве контроля использовали сперму, замороженную по’ принятой технологии. Опытную сперму обрабатывали методом диал | 2а Диаливатор представляет собой емкость из двух камер: внуту рэннейбраной, и наружной, разделенных между собой полупроницаемой Meh ного з наших опытах это гидратцеллюлозные пленки отечествен! ли производства и импортные типа "купрофан". Пленку закрепля онарезиновыми кольцами на циллиндре диаметром 45 мм, так, чтоб nani свисалаЛАЦИ-средумешочком(которуюв наружнуюиспользуюткамеру.при разбавленииВ наружную камерусемени поме»для
ИИ
|
- 187 -
амораживания в жидком азоте). Во внутреннюю камеру помешали Ювежевзятую сперму в количестве ТО мл. Соотношение спермы и среyen от Isl до 1:5. В сперму добавляли желток куриного яйца от 2 jo 3 % к объему. 2 a , Во время диализа при комнатной температуре (15-18°С) определяли в специальных опытах при постоянном медленном встряхивании (на приборе УЦ -4) в течение 1,2,3,4 часов. В дальнейшем Идиализ проводили в оптимальном режиме. Затем диализатор со сперМой переносили в холодильник на 2 часа для постепенного охлаждения. Замораживали сперму в алюминиевых п по 5 мл, оттаива|ли 8 водяной бане при температуре 40-42°C в течение 30 сек. После оттаивания 6: 5 доразбавления средами ыы под‘вижность спермиев в баллах и переживаемость при 37°C в часах в (сравнении с контролем.
В процессе диазиза изучали динамику концентрации водородных ионов (pH) в сперме и среде с помошью рН-метра.: Из испытанных сред для диализа наиболее подходящей оказалась ЛХЦЖ-среда, которая обычно используется при [ge lene спермы жеребца для замораживания в жидком азоте. Результаты по (16 опытам показали, что подвижность спермиев и переживаемость пр при 37°C после оттаивания в опыте незначительно отличается от контроля (табл. 1).
Таблица 1." Влияние диализа послеспермы оттаиванияв ЛХЦЖ-среде(n=16)на ее живучесть
|
ббработка спермы | Подвижность спермиев в баллах |Переживаемость 7 Ав uacax | перед заморажи-!после оттаива! | вания } HUR ! a Нате" г" | Контрольная ane ит "те 6 740.31 Диалиная 4,707 2,0000 __ 6,70, | При отработке параметров дизлиза были испытаны разные соОтношения спермы и среды. Наиболее подходяшим оказалось отноее“me 1:4
