Интенсификация селекции и технологии выращивания лошадей

• 186 -

. } подобрать в опытах подходящую среду не удалось. Не получили достаточной густоты сперму и при фракционном методе взятия эякулятов.

Одним из методов, позволяющим получить в объеме 4-5 мл достаточное количество спермиев для плодотворного осеменения, может служить диализный способ обработки спермы. При диализе, становится не обязательным элемент разбавления спермы в неск ко раз защитными средами на основе водного растворителя. Возн хает возможность в I мл замороженной спермы иметь в четыре рай больше спермиев, нежели в разбавленной криопротектором. В так случае по концентрации спермиев диализная сперма может у i лишь сгущенной центрифугированием. В то же время процесс цен: трифугирования является небезопасным для спермиев (Amann Pickett , 1987). Исходя из перечисленных предлосылок мы решие ли изучить пути диализной обработки спермы перед замораживани Этот метод использовался многими исследователями для продления жизни спермиев при комнатной температуре (Хронопуло Н.П. 1940$ Ван-Демарк, 1958; Бамба и др., 1979). Кононов В.П. и др. (1987) применил диализ при обработке спермы хряка для замораживания. | Были достигнуты определенные успехи. левичВА.Н.нашейи лабораторииЖмурин Л.М. метод(1958-1960)диализас цельюиспользовалиудаленияБуйко-Рог:больших | количеств глицерина из разбавленного семени. ) Сперму от жеребцов получали на искусственную вагину. Опрея деляли объем эякулата, подвижность спермиев в баллах, концен ар циюнию по стандарту Паршутина и Румянцевой. В опытах no определере Горяева.концентрации спермы после диализа подсчет проводили в каме| В качестве контроля использовали сперму, замороженную по’ принятой технологии. Опытную сперму обрабатывали методом диал | 2а Диаливатор представляет собой емкость из двух камер: внуту рэннейбраной, и наружной, разделенных между собой полупроницаемой Meh ного з наших опытах это гидратцеллюлозные пленки отечествен! ли производства и импортные типа "купрофан". Пленку закрепля онарезиновыми кольцами на циллиндре диаметром 45 мм, так, чтоб nani свисалаЛАЦИ-средумешочком(которуюв наружнуюиспользуюткамеру.при разбавленииВ наружную камерусемени поме»для

ИИ

|

• 187 -

амораживания в жидком азоте). Во внутреннюю камеру помешали Ювежевзятую сперму в количестве ТО мл. Соотношение спермы и среyen от Isl до 1:5. В сперму добавляли желток куриного яйца от 2 jo 3 % к объему. 2 a , Во время диализа при комнатной температуре (15-18°С) определяли в специальных опытах при постоянном медленном встряхивании (на приборе УЦ -4) в течение 1,2,3,4 часов. В дальнейшем Идиализ проводили в оптимальном режиме. Затем диализатор со сперМой переносили в холодильник на 2 часа для постепенного охлаждения. Замораживали сперму в алюминиевых п по 5 мл, оттаива|ли 8 водяной бане при температуре 40-42°C в течение 30 сек. После оттаивания 6: 5 доразбавления средами ыы под‘вижность спермиев в баллах и переживаемость при 37°C в часах в (сравнении с контролем.

В процессе диазиза изучали динамику концентрации водородных ионов (pH) в сперме и среде с помошью рН-метра.: Из испытанных сред для диализа наиболее подходящей оказалась ЛХЦЖ-среда, которая обычно используется при [ge lene спермы жеребца для замораживания в жидком азоте. Результаты по (16 опытам показали, что подвижность спермиев и переживаемость пр при 37°C после оттаивания в опыте незначительно отличается от контроля (табл. 1).

Таблица 1." Влияние диализа послеспермы оттаиванияв ЛХЦЖ-среде(n=16)на ее живучесть

|

ббработка спермы | Подвижность спермиев в баллах |Переживаемость 7 Ав uacax | перед заморажи-!после оттаива! | вания } HUR ! a Нате" г" | Контрольная ane ит "те 6 740.31 Диалиная 4,707 2,0000 __ 6,70, | При отработке параметров дизлиза были испытаны разные соОтношения спермы и среды. Наиболее подходяшим оказалось отноее“me 1:4

|

• 188 ~ Е В результате диализа при комнатной температуре объем " спермы — He ТО ит ie 8-7 мл. При Sas Lees спермиев увеличивалась более чем Йа 20 Е В следующей серии опытов бтояла задама, выбрать наиболее ко: роткий период выдержки спермы в диализаторе при комнатной температуре с оптимальными показателями после оттаивания, ` чтобы свизить расход жизненно важных вешеств спермиев (azcnaion | | В.К., 1962; Шергин Н.П., 1967) и уменьшить. контаминацию (Сокор И И:И и др = 1956) д Сравнение: Ep Г, Ptr 2,3 и 4 часовой диа,ee лизной обработки спермы ЛХЦИ-средой' при постоянномры. = встряхивании при комнатных условиях показало, что по. подвижности спе миев трудно и НЙ SaataИ а ее т же по переживаемости была сперма, выде! ная 2 voce, Tepexaal емость при Т,Зи 4 часах диализа достоверно ниже (P> 0,98; Р>0,99;_ Р> у 0,999) таблица 2. Таблица 2^. Влияние времени диализа спермы при комнатной температуре на выживаемость спермиев после оттаивания (п=В)r Sn Показатети eee a ee | Контроль! ВРЕМя диализа спермы в часах ! i 3 3 i eS а АЙ Подвижность спермиев . Е перед замораживанием 4,940,32 4,640,34 4,840,38 4,840,938 4,830‚ЗВ Подвижность спермиев + после оттаивания 2,4+0,18 1,940,11 2,1+0,11 2,0+0,09 2,040, pe bem EEGMOCEE в 7.00.39 5 140.28 6,540.27 5.54.26 4 50 Я Е Е ЕАН РЕНА, В процессе диализа значительно изменяется концентрация 5 водородных ионов в сперме и среде. С целью определения скорости диализа были проведены опыты по измерению pH (табл.3).. Таблиць, 3.