ИИ
|
- 187 -
амораживания в жидком азоте). Во внутреннюю камеру помешали Ювежевзятую сперму в количестве ТО мл. Соотношение спермы и среyen от Isl до 1:5. В сперму добавляли желток куриного яйца от 2 jo 3 % к объему. 2 a , Во время диализа при комнатной температуре (15-18°С) определяли в специальных опытах при постоянном медленном встряхивании (на приборе УЦ -4) в течение 1,2,3,4 часов. В дальнейшем Идиализ проводили в оптимальном режиме. Затем диализатор со сперМой переносили в холодильник на 2 часа для постепенного охлаждения. Замораживали сперму в алюминиевых п по 5 мл, оттаива|ли 8 водяной бане при температуре 40-42°C в течение 30 сек. После оттаивания 6: 5 доразбавления средами ыы под‘вижность спермиев в баллах и переживаемость при 37°C в часах в (сравнении с контролем.
В процессе диазиза изучали динамику концентрации водородных ионов (pH) в сперме и среде с помошью рН-метра.: Из испытанных сред для диализа наиболее подходящей оказалась ЛХЦЖ-среда, которая обычно используется при [ge lene спермы жеребца для замораживания в жидком азоте. Результаты по (16 опытам показали, что подвижность спермиев и переживаемость пр при 37°C после оттаивания в опыте незначительно отличается от контроля (табл. 1).
Таблица 1." Влияние диализа послеспермы оттаиванияв ЛХЦЖ-среде(n=16)на ее живучесть
|
ббработка спермы | Подвижность спермиев в баллах |Переживаемость 7 Ав uacax | перед заморажи-!после оттаива! | вания } HUR ! a Нате" г" | Контрольная ane ит "те 6 740.31 Диалиная 4,707 2,0000 __ 6,70, | При отработке параметров дизлиза были испытаны разные соОтношения спермы и среды. Наиболее подходяшим оказалось отноее“me 1:4
|
- 188 ~ Е В результате диализа при комнатной температуре объем " спермы — He ТО ит ie 8-7 мл. При Sas Lees спермиев увеличивалась более чем Йа 20 Е В следующей серии опытов бтояла задама, выбрать наиболее ко: роткий период выдержки спермы в диализаторе при комнатной температуре с оптимальными показателями после оттаивания, ` чтобы свизить расход жизненно важных вешеств спермиев (azcnaion | | В.К., 1962; Шергин Н.П., 1967) и уменьшить. контаминацию (Сокор И И:И и др = 1956) д Сравнение: Ep Г, Ptr 2,3 и 4 часовой диа,ee лизной обработки спермы ЛХЦИ-средой' при постоянномры. = встряхивании при комнатных условиях показало, что по. подвижности спе миев трудно и НЙ SaataИ а ее т же по переживаемости была сперма, выде! ная 2 voce, Tepexaal емость при Т,Зи 4 часах диализа достоверно ниже (P> 0,98; Р>0,99;_ Р> у 0,999) таблица 2. Таблица 2. Влияние времени диализа спермы при комнатной температуре на выживаемость спермиев после оттаивания (п=В)r Sn Показатети eee a ee | Контроль! ВРЕМя диализа спермы в часах ! i 3 3 i eS а АЙ Подвижность спермиев . Е перед замораживанием 4,940,32 4,640,34 4,840,38 4,840,938 4,830‚ЗВ Подвижность спермиев + после оттаивания 2,4+0,18 1,940,11 2,1+0,11 2,0+0,09 2,040, pe bem EEGMOCEE в 7.00.39 5 140.28 6,540.27 5.54.26 4 50 Я Е Е ЕАН РЕНА, В процессе диализа значительно изменяется концентрация 5 водородных ионов в сперме и среде. С целью определения скорости диализа были проведены опыты по измерению pH (табл.3).. Таблиць, 3.
| Изменение концентрации ee среде в процессе | водородных ee диализа | ионов в сперме и (n=7): er | ||
|---|---|---|---|---|
| | Первоначальная pH | | Время | диализа | (час) | |
| РН | р | О ИБ ОИ:ПЕ, | |||
| спермы 72 | 69 | 67 | 656 | 6% ; |
| pH среды 6 35 ЕЕ РЕ Аa | 6 17 i | 6 26 | 6.47 АИ | 6.52 |
- 189 =
За первый час диализа в данных условиях рН спермы уменьвется от слабощелочной (7,42) до слабокислой (6,9), т.е. на = :За Не.А РН изменяется = на a" В дальзеИЕин а виrfvoit bemoonranr ионов р 6;52 в‘ еперме и среде при, комнатной температуре и постоянном ереживасмость:времешивании. проходилиспермиевht? в`при среднем4-х часовойза 4 vaca.выдержкеHO подвижностьв диализе пос-и o а. мопри 2— ой до знамени Яleттаивания была ниже, чем ‘при 2-х часовой до знамений pH у Сопоставление данныхС рН-метрии; а также подвижности и переиваемости спермиев дают возможность определить наименьший пеee; [2ки ЗО иЕЕ ЧТи ETERS SHORTEN,слови. ПОЗЕ не Таким образом, поставленные опыты показали, что при диализе . aeе ЛХЦЖ-средойре отпВаетАнессхолиеобходимость четырехкрчетырехкратного рразВ. . В то же время не снимается с повестки дня задача совершенствования криозащиты спермиев при диализной обработке. Работы ) этом направлении только начались и в дальнейшем предстоит у м провести еше дополнительно соответствующие поисковые исследо | pula.
На основании первых поставленных опытов по диализу спермы исжно сделать следующие выводы: I. Диализ спермы с ЛХЦЖ-средой позволяет без центрифугирования в четыре раза снизить объем замораживаемой разовой дозы спермы. р
- По подвижности и переживаемости обработанные диализом и неразбавленные после оттаивания образцы спермы несколько устуNaot контрольным образцам, обработанными по принятой технологии. Литература Т. Удаление глицерина из оттаянной спермы методом диализа: Отчет о НИР / MCX СССР. ВНИИ коневодства; Руководитель Буйко-РоГелевич2. А.Н.Разработка- ВНИИК,метода1958.длительного хранения спермы жеребца. ) замороженном состоянии при -20°C: Отчет о НИР / MCX CCCP. BHAM коневодства; Руководитель Жмурин Л.М. - ВНИИК, 1960.
