функцией, обеспечивающей протекцию против различных механизмов клеточной защиты хозяина [102,104,106,107]. Работами целого ряда авторов продемонстрировано антифагоцитарное действие инкапсулированных штаммов Pasteurella multocida серотипа А на нейтрофиллы крупного рогатого скота в тестах in vitro [108,109,110]. Несмотря на эту неоднократно подтвержденную точку зрения, по мнению Dubrenil J.D. et al. [111], не всегда наличие капсулы коррелирует с вирулентностью штаммов Pasteurella multocida и определяет их антифагоцитарную активность.
Тем не менее, замечено, что диссоциативные изменения, связанные с нарушением синтеза капсулы, в частности капсульных полисахаридов, сопровождались снижением или полной потерей вирулентности и иммуногенной активности. Капсулы представляют собой внеклеточное слизистое образование, более или менее выраженный наружный слой в составе клеточной оболочки многих грамотрицательных бактерий. Анализ большого количества штаммов позволил выявить корреляцию между толщиной капсульного слоя и серовариантной принадлежностью штамма. Замечено, что сероварианты А и Д проявляют сильное инкапсулирование. У клеток этого типа при дополнительной стабилизации наблюдается внеклеточное образование толщиной 70-90 и 10-30 нм от внешней мембраны соответственно для указанных выше серовариантов [112,113]. По данным Коломниной Г.Ф. и др., Pasteurella multocida сероварианта В при определенных условиях культивирования тоже формирует капсулу или микрокапсулу [101]. Ряд авторов отмечает зависимость процессов капсулообразования от условий и сроков культивирования бактерий [108,109,114,115].
Относительно химической природы капсульного материала единого мнения нет. Большинство авторов указывают, что капсульные экстракты представляют собой белково-полисахаридный комплекс с примесями веществ различной биохимической природы. Соотношение основных компонентов в неочищенных экстрактах различно и варьирует от штамма, серовариантной принадлежности, условий культивирования бактерий и метода экстракции. Согласно литературным данным содержание протеинов составляет от 37,7% до 55,1% углеводов - от 4,71% до 14,8% [106,111,116, 117].
Исследование белковых компонентов капсул Pasteurella multocida различных серовариантов методом электрофореза продемонстрировало их неоднородность. В капсульном материале вирулентных штаммов было выявлено до 12 белковых полос [118,119].
Pirocky P. удалось выделить полисахаридные компоненты из гладких культур Pasteurella multocida [120]. Из капсульного вещества Pasteurella multocida серовариантов А и Д, полученных по методу Carter, были выделены муцинозные полисахариды, содержащие равное
количество гексозамина и уроновой кислоты. Качественный анализ углеводных компонентов Pasteurella multocida сероварианта А, выделенных от различных видов животных и человека, показал наличие гиалуроновой кислоты [97,98, 121]. В дополнение к изложенному, в 1993 году появилось сообщение о выделении методом бумажной хроматографии гиалуроновой кислоты из капсульного материала штаммов Pasteurella multocida сероварианта Д, изолированных из легких свиней [122].
Анализ литературных данных показал отсутствие целостного представления о биохимических и физико-химических свойствах капсульного материала Pasteurella multocida различных серовариантов, но указывает на значительную важность ее в иммунологической реакции, как основного антигенного фактора.
Многими авторами подчеркивается сложность антигенного состава капсульной субстанции Pasteurella multocida с различной степенью активности отдельных компонентов. В ряде работ сообщается о выделении методом гель-фильтрации из капсульных антигенов высокомолекулярной фракции, обладающей выраженными антигенными свойствами [123,124]. По мнению ряда авторов, капсульное вещество Pasteurella multocida является полноценным антигеном и в значительной мере определяет антигенную специфичность штаммов [101,102,103]. В ряде серологических тестов (РА, РНГА) была продемонстрирована специфичность капсульных антигенов, на основании чего штаммы Pasteurella multocida делятся на серологические варианты [125,126].
Учитывая сложность антигенного строения капсульной субстанции Pasteurella multocida, исследователи расходятся во мнении относительно компонентов, детерминирующих антигенную активность. В целом у Pasteurella multocida установлено 18 растворимых антигенов, два из которых лежат на поверхности клетки: соматический термостабильный и капсульный термолабильный специфический антигены. Тем не менее, точная топографическая локализация антигенов как в капсуле, так и в клетке в целом не выявлена [91,92,93].
Основными антигенами являются соматический термостабильный протективный, общий для рода пастерелл, и капсульный полисахаридный термолабильный специфический, в зависимости от которых пастереллы делятся на несколько групп. Четыре капсульных типа Pasteurella multocida обозначены через А, В, С и Е [95,96,127].
Pasteurella multocida состоит более чем из 16 сероваров, некоторые из них ассоциированы с определенными видами животных и симптомами болезни. Серовары В:2 и Е:2 являются возбудителями геморрагической септицемии у крупного рогатого скота и водяных буйволов, серовары А:1 и А:3 – возбудителями пастереллеза птиц [128,129,130].
Современные представления об основных компонентах, ассоциированных с капсульным веществом, можно резюмировать так:
1) β-антиген – типоспецифический полисахарид, адсорбируется на эритроцитах в реакции непрямой гемагглютинации: встречается в микроорганизмах, которые дают флюоресцирующие и мукоидные варианты;
2) d-комплекс – полисахаридно-белковый, тесно прикрепляющийся к клеточной стенке, иммуногенный, видимо, в некоторой степени лабильный;
3) γ-антиген – липополисахарид, встречающийся у микроорганизмов всех вариантов, входящий в состав клеточной стенки; у каждого одна или более антигенных детерминант, ответственных за различные О-, или соматические, серовары [131,132].
Многие исследователи указывают на вариабельность биохимических свойств возбудителя пастереллеза. По данным некоторых исследователей биохимический тест нельзя использовать для дифференциации штаммов возбудителя различного зоологического происхождения, который заключается в сбраживании сахарозы, глюкозы [133,134]. Khalifa I.A., напротив, установил зависимость биохимических свойств штаммов от зоологического происхождения. [135]. По данным Breed R.S. et al. [136], Pasteurella multocida, как правило, не ферментирует лактозу, но имеются исключения. Так, штаммы разлагающие лактозу, описаны некоторыми учеными. Эти бактерии обычно не свертывают молоко, не изменяют его реакцию [137,138]. Pasteurеlla multocida не коагулирует плазму кролика и морской свинки. Желатину и свернутую сыворотку не разжижает, не вызывает гемолиза, но образует индол и сероводород. Восстанавливает нитраты до нитритов, дает отрицательную пробу с метиленовым красным. Мочевину не разлагает, разрушает перекись водорода. Ферментирует сахара, спирты и гликозиды с образованием кислоты без газа. Как указывают Breed R.S. и др., Pasteurella multocida сбраживает глюкозу, сахарозу, фруктозу, сорбит, галактозу, маннозу и как правило, маннит, ксилозу и трегалозу; не ферментирует лактозу, дульцит, амигдалин, рафинозу, рамнозу, адонит, декстрин, инулин, глицерин, эритрит, салицин, мальтозу и арабинозу. У Pasteurella multocida видовым признаком следует считать лишь способность ферментировать глюкозу, сахарозу, маннозу и галактозу с образованием кислоты без газа, не разжижать желатину, не свертывать и не пептонизировать молоко и, как правило, не образовывать сероводород [85,112,133,134,139,140].
1.2 Диагностика пастереллеза
Диагноз пастереллеза ставится комплексно, с учетом данных эпизоотологии, клиники, данных патологоанатомических изменений и
