биовариантных групп. LktA ген был обнаружен в 108 (44 %) изолятах, включая 15 связанных с болезнями дыхательных путей. Все кроме 2 (98 %) изолятов, у которых был lktA ген, были бета-гемолитиками когда выращивались на кровяном агаре овец [201].
Boucher DJ, Adler B, Boyce JD. использовали множество методов, чтобы идентифицировать факторы вирулентности Pasteurella multocida, включая технологию экспрессии in vivo (IVET). Ими был сконструирован изогенный штамм P. multocida , который не был способен редуцировать нитриты при аэробных и анаэробных условиях, таким образом, демонстрируя, что nrfE ген P. multocida является существенным для редукции нитритов. Однако, nrfE мутант оставался вирулентным для мышей. Анализ ОТ-ПЦР в реальном времени показал, что nrfE был отрегулирован независимым от nrfABCD покровителем, который, вероятно, является сорегулятором в естественных условиях [202].
С целью получения больших данных о молекулярной биологии Pasteurella multocida Ewers C, Lübke-Becker A, Bethe A, Kiebling S, Filter M, Wieler LH. исследовали методом ПЦР и ДНК-ДНК гибридизации гены капсульного биосинтеза (capA, B, D, E, и F) и 14 вирулентно ассоциативных генов 289 штаммов, изолированных от различных клинически здоровых и больных животных. Как ожидалось, штаммы капсульного типа были чрезвычайно адаптированы к крупному рогатому скоту (92.3 %) и домашней птице (85.7 %), в то время как, capA (34.9 %) и capD (58.1 %) - позитивные штаммы выделены от свиней. Значимое количество capD-положительных штаммов выделены от мелкого рогатого скота (34.9 %) и capF - в штаммах дикого типа от больного крупного рогатого скота (2.2 %) и кошек (7.4). Гены toxA, tbpA и pfhA предположительно так же, как гены капсульного биосинтеза, являются важными эпидемиологическими генами маркерами для того, чтобы характеризовать штаммы Pasteurella multocida [203].
Orth J.H., Aktories K., Kubatzky K.F. методами ПЦР выяснили, что токсин Pasteurella multocida (PMT) вызывает активацию STAT белков, и идентифицировали STAT1, STAT3, и STAT5 белки как новые цели PMT индуцированных Galpha (q) сигналов. Поскольку конститутивная активация STAT белков была найдена во многих раковых образованиях, результаты данных исследований предлагают новый механизм канцерогенной роли PMT [204].
Tang X, Zhao Z, Hu J, Wu B, Cai X, He Q, Chen H. в 2009 году исследовали в общей сложности 233 изолята Pasteurella multocida на чувствительность к 20 антибиотикам и присутствие 19 генов факторов вирулентности (VFs), полученные от 2 912 случаев клинического пастереллеза свиней в Китае. Частота антибактериальной резистентности среди изолятов P. multocida, выделенных от свиней в
Китае, была выше чем, среди изолятов P. multocida, выделенных от свиней в других странах, и 93 % изолятов показали многократную устойчивость к антибиотикам. Профили резистентности указывают, что цефалоспорины, флорфеникол, и флуороквинолон (fluoroquinolones) были лекарствами наиболее активными против Pasteurella multocida. Использование ПЦР показало, что факторы вирулентности (ptfA, fimA, и hsf-2), факторы усвоения железа и наружные мембранные белки распространены в большинстве свиных штаммов. Факторы вирулентности - pfhA, tadD, toxA, и pmHAS, каждый, были представлены в около 50 % штаммах. Различные факторы вирулентности показали отдельные ассоциации с серогруппами: сконцентрированные в серогруппе A, сконцентрированные в серогруппе D, или находящиеся совместно в серогруппах A и D [205]. Townsend KM, Frost AJ, Lee CW, Papadimitriou JM, Dawkins HJ. путем геномной гибридизации близкородственных изолятов Pasteurella multocida, получили клоны, полезные для идентификации штаммов типа B от других серотипов P. multocida, вызывающих геморрагический сепсис. Олигонуклеотидные праймеры, разработанные на последовательность этих клонов оказались ценными в разработке ПЦР анализа для быстрой видо- и типоспецифичной идентификации Pasteurella multocida, и типа B:2, в частности. Это исследование показало, что пара праймеров сконструированная на последовательности клона 6b (KTT72, и KTSP61) амплифицировала специфичный фрагмент ДНК серотипов B:2, B:5, и B:2,5 P. multocida и что праймеры, KMT1T7 и KMT1SP6 амплифицировали, уникальный для всех проанализированных изолятов Pasteurella multocida продукт. По мнению ученых, ПЦР амплификация, выполненная непосредственно на бактериальных колониях или культурах представляет чрезвычайно быстрый, чувствительный метод идентификации P. multocida [206].
Индийские ученые разработали метод ПЦР анализа, основанный на последовательности гена hyaC-hyaD, для идентификации штаммов Pasteurella multocida серогруппы A. Сконструированные серогруппоспецифичные праймеры амплифицировали продукт размером 564 пн геномной ДНК, выделенной из бактериальных клеток или непосредственно бактериальных колоний. У этого метода, обнаруживающего 10 нанограммов бактериальной ДНК была 100 % специфичность для P. multocida серогруппы A. Метод nested ПЦР привел к единственным 374 bp продуктам. Все пятьдесят изолятов, как показал также анализ рестрикции полиморфизма длин фрагментов ( ПДРФ -RFLP) с BglII., были идентичны продуктам ПЦР [207].
Они изучили применимость обычных и молекулярных методов для быстрого выявления и дифференцирования Pasteurella multocida серогруппы B изолированных от индийских буйволов при вспышке
геморрагической септицемии в Индии. Было получено пять изолятов, которые были подвергнуты фенотипической и генотипической характеристике. Ни один из этих пяти изолятов, не мог быть дифференцирован на основе культуральных, биохимических методов, патогенности и антибактериальной чувствительности. Методы на основе ПЦР были специфичными и чувствительными для быстрого выявления и дифференцирования изолятов. Методами REP - ПЦР, ERICПЦР, ПЦР с одним праймером дифференцировали различные профили всех пяти изолятов. У всех изолятов, генетический профиль отличался от стандартного штамма P. multocida - P52. Однако, три изолята, имели идентичные профили, тогда как, у каждого из оставшихся двух был различный профиль. Исследование указывает на причастность многих штаммов P. multocida к одной вспышке геморрагической септицемии буйволов. Результаты также показывают, что молекулярные методы выявления и типирования P. multocida превосходят обычные методы для быстрых эпизоотологических исследований геморрагической септицемии [208].
Также применимость молекулярных методов изучена для обнаружения и дифференцирования штаммов Pasteurella multocida, вовлеченных в две отдельных вспышки пастереллеза домашней птицы на одной птицеферме. В общей сложности 12 и 18 штаммов P. multocida выделенные из двух отдельных вспышек были подвергнуты фенотипической и генотипической характеристике. Фенотипически, все штаммы были подобны; однако методы ПЦР анализа были очень специфичными и чувствительными для быстрого выявления и дифференцирования штаммов. Все 30 штаммов дали ампликоны приблизительно 460 п.о и 1 044п.о, специфичные для P. multocida и капсульных серогрупп в мультиплексной капсульной ПЦР типирующей системе. Молекулярные методы типирования, такие как REP -ПЦР , ERIC- ПЦР и ПЦР с одним праймером дифференцировали все 30 штаммов в различные профили. Однако, по результатам анализа эндонуклеазной рестрикции, с использованием фермента HpaII, сходные образцы фрагментов генома наблюдались среди всех штаммов. Исследование показало причастность тех же самых многочисленных штаммов P. multocida к двум вспышкам [209].
Pasteurella multocida состоит из трех подвидов, которые часто дифференцируются ферментированием сорбита и дульцита. Hunt Gerardo S, Citron DM, Claros MC, Fernandez HT, Goldstein EJ. изучили 35 дульцитол-отрицательных изолятов P. multocida, выделенных из инфицированных укушенных ран собак и кошек, 16 из которых привели к слабым или противоречивым реакциям сбраживания сорбитола, таким образом мешая различать два дульцитол - отрицательных подвида P. multocidа: P. multocida subsp. multocida и P. multocida subsp. septica. Все
