белки наружной мембраны, нейраминидазу, липопротеины и полисахариды [205,207]. Последовательности геномной ДНК кодируют всю наследственную информацию, ответственны за микробиологическую репликацию, вирулентность, высокую специфичность, способность противостоять иммунной системе; знание обширного генома Pasteurella multocida как патогена, дает всю необходимую информацию, нужную для эффективных и целевых исследований в лечении, профилактике и диагностике болезней, вызываемых этим возбудителем. Thomas S. Whittam, Vivek Kapur [221] провели сравнительный анализ полных геномов Pasteurella multocida, Haemophilus influenzae и Escherichia coli. Были выровнены 1197 кодирующих последовательностей всех 3 организмов, установлен процент идентичности аминокислот в выравнивании. Установлено эволюционное родство между Pasteurella multocida, Haemophilus influenzae и Escherichia coli. Сравнение последовательностей позволило различить 200 кодирующих последовательностей (10%), уникальных для Pasteurella multocida и 1197 кодирующих последовательностей ортологичных геномам Haemophilus influenzae и Escherichia coli. Эти результаты согласуются с тем, что они полностью близкородственны и подтверждают классификацию этих бактерий в Υ подразделе протеобактерий.
Состав полного генома Pasteurella multocida Количество кодирующих последовательностей – 2014 Гомологичные пептидам – 1814 Гомологичные протеинам – 531
Кодирующие последовательности уникальние для Pasteurella multocida - 200
Гомологичные Haemophilus influenzae - 1421 Гомологичные Escherichia coli - 1392 Ортологичные Escherichia coli - 223 Ортологичные Haemophilus influenzae - 195 Содержание GC пар - 41% Средний молекулярный вес белков - 37,081Кд Средний размер генов - 997 п. о тРНК - 57 рРНК опероны - 6
Анализ данных литературы показал, что пастереллезная инфекция имеет широкое распространение во многих странах, в том числе и в Республике Казахстан. На территории Казахстана, согласно данным
ветеринарной отчетности, имеются энзоотические вспышки пастереллеза среди крупного рогатого скота, лошадей, свиней, птиц. К пастереллезу восприимчивы крупный рогатый скот, лошади, мелкий рогатый скот, буйволы, козы, свиньи, грызуны, кошки, собаки, дикие животные, домашние и дикие птицы.
Пастереллез распространен повсеместно, но чаще регистрируется в странах с тропическим и субтропическим климатом. Достаточно широко пастереллез распространен на территориях стран СНГ, в том числе и в Казахстане. Летальность при пастереллезе колеблется от 10 до 100%.
Диагноз пастереллеза ставится комплексно, с учетом данных эпизоотологии, клиники, данных патологоанатомических изменений и бактериологического исследования. Каждый из методов диагностики имеет ценность лишь в совокупности с другими методами, в особенности с результатами патологоморфологических и лабораторных исследований.
Обнаружение у заболевших животных сходной с пастереллезом клинической картины не дает права ставить диагноз на пастереллез, так как имеется ряд заболеваний, клиническое течение которых очень напоминает пастереллез. Патологоанатомические данные достаточно выражены при остром течении пастереллеза, но не патогномоничны, и ставить диагноз только на основании их нельзя.
Для бактериологического исследования в лабораторию посылают отдельные органы. Выделение культуры пастерелл при бактериологическом исследовании без учета результатов, полученных другими диагностическими методами, также не дает оснований для постановки диагноза на это заболевание, так как при пастереллезе наблюдается широкое бактерионосительство как среди переболевших, так и среди клинически здоровых животных, контактировавших, а иногда и неконтактировавших с животными неблагополучных хозяйств. Совокупность сведений по эпизоотологии, клинической и патологоанатомической картине дает право на постановку предварительного диагноза, результаты же бактериологических и биологических исследований позволяют поставить диагноз окончательно.
Серологический диагноз при пастереллезе имеет меньшее значение, чем такие методы диагностики, как бактериологический и биологический, так как болезнь протекает быстро. Но с целью своевременного и более полного выявления и в неблагополучных и в благополучных хозяйствах скрытых больных и животныхпастереллоносителей применение серологических реакций имеет немалое значение.
Для серологической диагностики используют реакции агглютинации, связывания комплемента, преципитации, гемагглютинации, адсорбции агглютининов и другие.
Реакцию агглютинации (РА) пробовали применять для выявления птиц-пастереллоносителей, но отсутствие стандартных антигенов не позволяло дать объективную оценку этому методу диагностики, хотя S.Nomioka и M.Murata довольно успешно с помощью реакции агглютинации разделили соматические антигены на несколько групп.
На сегодняшний день наиболее часто используемым диагностическим методом для диагностики пастереллеза является ИФАдиагностика. В настоящее время в России и Казахстане для исследований на пастереллез животных используется набор для выявления антител к возбудителю пастереллеза (Pasteurella multocida) иммуноферментным методом фирмы «Synbiotics Europe» (Франция). Являясь косвенным методом, ИФА определяет лишь белки-маркеры - продукты жизнедеятельности инфекционных агентов, что дает лишь опосредованное свидетельство наличия инфекции.
В отличие от иммуноферментного анализа (ИФА), ПЦРдиагностика позволяет определять непосредственно возбудителя заболевания. Высокая специфичность метода ПЦР обусловлена тем, что в исследуемом материале выявляется уникальный, характерный только для данного возбудителя фрагмент ДНК. Высокая чувствительность метода позволяет выявлять даже единичные клетки бактерий или вирусов. К преимуществам метода можно отнести высокую скорость получения результата анализа и возможность диагностики острых, вялотекущих и скрытых инфекций. Результаты исследований, проведенные учеными разных стран, также показывают, что молекулярные методы выявления и типирования Pasteurella multocida превосходят обычные методы в случае необходимости быстрых эпизоотологических исследований геморрагической септицемии и могут использоваться в эпизоотологических исследованиях как программа мониторинга. Современные молекулярные методы, такие как ПЦР, анализ ферментной рестрикции, риботипирование, пульс гель электрофарез, генное клонирование, характеристика и экспрессия рекомбинантных белков, мутагенез, анализ плазмид и бактериофагов и геномная картография, очень увеличили понимание Pasteurella multocida, и предоставили исследователям много молекулярных инструментов для изучения патогенеза и эпизоотологии данного возбудителя на молекулярном уровне.
Оценка двух методов молекулярного типирования - ERIC-ПЦР и Apal-PFGE позволила сгруппировать эпизоотически связанные штаммы и четко дифференцировать несвязанные штаммы, что дает возможность
