увеличивается. Большое внимание к ним уделяется в связи с аллергизирующей их способностью, так как по результатам туберкулиновой пробы решается вопрос: подлежит животное убою, или нет. Все это обусловило поиски различных методов дифференциации кислотоустойчивых микобактерий от возбудителей туберкулеза.

Кислотоустойчивые сапрофиты сравнительно нетрудно отличить от микобактерий туберкулеза, так как, кроме отсутствия патогенности для морских свинок и белых мышей, они на питательных средах растут при комнатной температуре в течение 4 - 5 дней.

Атипичные микобактерии, с одной стороны, имеют черты сходные с микобактериями туберкулеза - морфологию, кислото- и спиртоустойчивость, а с другой - по ряду свойств близки сапрофитам: вид колоний, скорость роста, ферментативная активность и лекарственная устойчивость. Все это обусловило поиски многочисленных методов для дифференциации микобактерий.

Для дифференциации атипичных и сапрофитных микобактерий от микобактерий туберкулеза ВОЗ дает рекомендации, разработанные на симпозиуме в г. Праге в июне 1964 г., по использовании двух групп тестов: основных и дополнительных. К основным относятся тесты: спиртоустойчивость, окраска по Граму, рост при температуре 22 - 37⁰ C (таблица 1), скорость роста, морфология колоний, их пигментированность. Сюда же включены биохимические тесты: ниациновый, амидазные, восстановление нитритов и нитратов, некоторые ферментативные реакции (с липазой, фосфатазой), а также биологические тесты на подопытных животных (морские свинки, кролики, белые мыши, птицы).

Таблица 1. Культуральные свойства атипичных и туберкулезных микобактерий.

К дополнительным тестам относятся: действие на глициды, чувствительность к туберкулостатикам; каталазная и пероксидазная активность (табл. 2).

Патогенность атипичных и кислотоустойчивых микобактерий изучают на морских свинках, кроликах и белых мышах. Как правило, атипичные

микобактерии не приводят к гибели животных, за исключением M. intracellularae. Оптимальная доза для подкожного заражения обычно 1 мг.

Атипичные микобактерии первой и второй групп вызывают на месте введения незначительные изменения, которые обнаруживаются в легких и пёчени и через 2 - 3 месяца полностью рассасываются.

Доза для внутрикожного заражения 0,1 мг в 0,2 мл дистиллированной воды. Место введения - кожа брюшной стенки. Вирулентные культуры вызывают на коже незаживающие язвы, при введении атипичной культуры язвы заживают через месяц, caпрофиты каких-либо изменений не вызывают. Для внутри тестикулярного заражения морских свинок используют 1 мг микобактерий в виде взвеси в 0,25 мл дистиллированной воды. При введении туберкулезной культуры на 15-й день тестикул уплотняется и увеличивается в размере, к 30 - 45-му дню в нем образуются казеозные очаги, через 2 мес. морские свинки погибают от генерализованной формы туберкулеза. Атипичные микобактерии первой и второй групп по классификации Раниона к 30 - 45-му дню вызывают появление очажков в тестикуле, которые через 3 месяца полностью исчезают. При введении микобактерий, относящихся ко второй группе, отмечается лишь уменьшение тестикула, а при использовании микобактерий четвертой группы изменений не бывает.

Таблица 2. Наиболее простые тесты, используемые при идентификации микобактерий.

Каждым приведенным методом исследования в отдельности не всегда удается определить принадлежность культуры к типичным или атипичным микобактериям. Только комплексное применение ряда бактериологических, биохимических и биологических исследований позволяет правильно идентифицировать культуры микобактерий.

Л-формы микобактерий.

Микобактерии туберкулеза обладают способностью персистировать в организме в Л-формы (З.С. Земская, И.А. Дорожкова, 1978; Ю.Л. Шевченко, 2000). В период снижения резистентности организма, или под действием каких либо других факторов, например применение антибактериальных средств, Л-формы микобактерий туберкулеза дают реверсию, то есть переходят в классическую форму.

Р.А. Хамзиным (2006) было проведено 5 последовательных пассажей 28 Л-форм микобактерий туберкулеза выделенных из патологического

материала от крупного рогатого скота, на морских свинках и на среде Школьниковой в модификации Дорожковой, в ходе которых получено 6 культур ревертантов. Культуры окрашивались по Цилю-Нильсену для изучения тинкториальных свойств. Затем у полученных культур Л-форм микобактерий туберкулеза изучали цитохимические свойства и каталазную активность. Первичный рост культур ревертантов микобактерий на плотных питательных средах в виде сухих морщинистых колоний типа «R» обнаруживался на среде Левенштейна-Йенсена на 15 – 18 сутки. В мазках окрашенных по методу Циля-Нильсена автор наблюдал стройные тонкие палочки, свободно лежащие зерна, расположенные отдельно и цепочками коккообразные формы с различной интенсивностью окраски. Если при проведении 5 последовательных пассажей, реверсии в бактериальный вид не обнаружено, то культуры считались условно стабильными. У стабильных Л- форм микобактерий, склонных к реверсии, при культивировании отмечено образование тяжей и кос, характерных для бактериальной формы микобактерий.

При исследовании каталазной активности культуры-ревертанты Л- форм микобактерий обладали выраженной каталазной активностью, проявляющееся в обильном выделении газа в течении первых трех минут. Изменение цитохимических показателей культур ревертантов зависели от продолжительности пассирования Л-форм микобактерий. При исследовании лекарственной чувствительности культур ревертантов установлено, что они являются устойчивыми к стрептомицину в концентрации 5 мкг/мл, тубазиду в концентрации 1 мкг/мл среды. При добавлении в среду ПАСК в концентрации 1 мг/мл обнаружен скудный рост характерных колоний. Наиболее лекарственно устойчивы к противотуберкулезным препаратам культуры ревертанты Л-форм более поздних пассажей.

Лабораторные животные зараженные подкожно культурой ревертантов Л-форм микобактерий, значительно снижали массу тела (на 18,4 %). Результаты исследования вирулентных свойств ревертантов свидетельствуют об их вирулентности для лабораторных животных (морских свинок) и продолжительность пассирования Л форм в значительной мере влияет на вирулентность ревертантов.

ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ДАННЫЕ

При туберкулезе, как при других инфекционных болезнях, главенствующими остаются три фактора эпизоотического процесса, определяющих его непрерывность - источник инфекции, механизмы передачи возбудителя болезни, восприимчивое животное. Как известно, разрыв этого треугольника, исключение из него хотя бы одного из трех звеньев устраняет возможность возникновения и развития эпизоотического процесса.

Кроме первичных, существуют еще и вторичные факторы эпизоотического процесса: природно-географические и социально-