После заражения лабораторных животных рекомендуется через каждые 10 дней проверять увеличение паховых лимфоузлов на той стороне, где вводили исследуемый материал. Если лимфоузлы прощупываются в конце шестой недели, то животных убивают, если нет, то рекомендуется выждать еще 2-3 месяца, а затем произвести убой (табл. 4). При неясных результатах исследования повторно заражают 3 - 5 морских свинок, наблюдают за ними 3 месяца.
Таблица 4. Определение вида микобактерий тубёркулеза при заражении лабораторных животных (доза1мг).
| Вид животного | Способ заражения | Вид микобактерий | ||
|---|---|---|---|---|
| бычий | человечий | птичий | ||
| Кролики | внутривенно | Гибель через 17-50 дней при генерализованной форме туберкулеза | Наличие очагов туберкулеза в печени | Гибель через 10- 15 дней от сепсиса |
| Морские свинки | подкожно | Генерализованная форма туберкулеза через 60-90 дней | Генерализованная форма туберкулеза через 60-90 дней | - |
| Куры | внутримышечно | - | - | Генерализованная форма туберкулеза через 60-90 дней |
Для выделения возбудителя туберкулеза при латентной форме рекомендуется выдерживать подопытных животных до 6 месяцев (А.И. Кузин, 1980).
Сопоставляя биологический метод с другими, И. Дайглер (1952) установил, что биопроба подтверждает туберкулез во всех 100% случаев. B целом биологической пробой удается выделить возбудителя в 2 раза чаще, чем методом посева (Кoster zenski и др., 1978). Однако широко применяемые химиотерапевтические средства и антибиотики снизили вирулентность одних штаммов возбудителя туберкулеза по отношению к морской свинке, а других даже сделали авирулентными. Поэтому проблема совершенствования биологического метода диагностики туберкулеза, особенно для выявления микобактерий с ослабленной вирулентностью остается нерешенной.
Предпринимаются попытки искусственно повысить чувствительность лабораторных животных к ослабленным штаммам микобактерий. Установлено, что можно усилить туберкулезный процесс у этих животных путем введения им иммунодепрессантов и лекарств, понижающих резистентность организма. Так, с этой целью можно кроликам внутривенно инъецировать 5%-ный аллоксан на физрастворе в дозе 120 мг на 1 кг массы, морским свинкам – внутримышечно адренокортикотропный гормон (AKTF)
в течение недели по 30 единиц. Кролики, получившие аллоксан и зараженные микобактериями, уже через месяц значительно истощались, на вскрытии у них обнаруживалось злокачественное течение туберкулеза; у контрольных животных такие изменения были обнаружены лишь через З мес. У морских свинок, которым вводили АКТГ, множественные туберкулезные изменения обнаружены через 3 недели после заражения, а у контрольных - к этому сроку отмечены лишь единичные туберкулезные узелки в печени (М.А. Сафин и соавт., 1971).
Идеального метода диагностики туберкулеза пока нет. Blancau (1972), сравнив различные методы диагностики, установил, что у туберкулезного крупного рогатого скота реакция преципитации давала 40% положительных результатов, реакция диффузии в агаровом геле - 37, реакция пассивной гемагглютинации - 34, внутривенная проба - 48, подкожная проба - 94, внутрикожная проба - 96%. Эти же методы у здорового крупного рогатого скота давали ложные реакции соответственно в 10, 8, 12, 4, 10, 16% случаев. Поэтому первичный диагноз на туберкулез по туберкулиновой пробе обязательно должен быть подтвержден послеубойным патологоанатомическим осмотром лимфоузлов и внутренних органов, а также лабораторными исследованиями.
Неспецифические реакции на туберкулин.
Не умаляя значения общепризнанных положительных качеств аллергической диагностики туберкулеза, многие исследователи указывают на непостоянство и другие недостатки этого метода и отмечают необходимость его дальнейшего совершенствования.
Одним из существенных недостатков аллергической диагностики туберкулеза является появление у здоровых животных неспецифических реакций на туберкулин, обусловленных причинами самого разнообразного характера. Убой таких животных обычно не приводил к прекращению выделения реагирующих из остального поголовья. Такое явление, имеющее довольно широкое распространение, стало серьезной проблемой.
Bo Франции животные с неспецифическими реакциями составляли в 1964 г. - 16,4, а в 1971 г.- 30%; в CШA в 1945 г. -10; а в 1961 г.- 50% от числа реагировавших животных (Lucas, 1972). B отдельных странах даже благополучных по туберкулезу крупного рогатого скота, до 75% животных дают неспецифические реакции на туберкулин (Nassol, 1965; Schlisser, 1969; Ionoviec, 1972).
Неспецифические реакции на туберкулин регистрируются и в хозяйствах PT. Так в 1995г. в 506 хозяйствах, благополучных по туберкулезу было выявлено 5809, в 1996 году в 687 хозяйствах 10448, а за 10 месяцев 1997 года в 698 хозяйствах 6234 крупного рогатого скота, реагирующего на туберкулин, большинство из которых сданы на убой. При послеубойном осмотре туш и внутренних органов изменений, характерных для туберкулеза
не обнаружено и выделить возбудителя туберкулеза не удалось (М.А.Сафин, 1997).
В целях выявления этиологии туберкулиновых реакций в 12 ранее оздоровленных от туберкулеза крупного рогатого скота хозяйствах, было убито 180 животных, реагировавших на туберкулин. Биоматериал от них подвергался лабораторным исследованиям на туберкулез, в результате чего было выделено 28 культур, из которых в одном случае установлен возбудитель туберкулеза в типичной бактериальной форме, 12 культур на основании изучения культуральных и биохимических свойств были отнесены к атипичным микобактериям. В 6 случаях были изолированы микобактерии представляющие собой смесь бактериальных и Л-форм, а в 9 случаях выращены только Л-формы микобактерий. Анализ полученных материалов показал, что основной причиной появления реагирующих животных после снятия ограничений по туберкулезу крупного рогатого скота является Л- трансформация микобактерий туберкулеза у животных с латентным течением болезни, а также сенсибилизация организма животных атипичными микобактериями. Полученные данные ещё раз подтверждают необходимость своевременного выявления животных с латентной формой течения туберкулеза. При появлении реагирующих на туберкулин животных в ранее оздоровленных хозяйствах, необходимо проводить бактероилогическое исследование материала, включая выявление Л-форм микобактерий (Хамзин Р.А., 2006).
Наиболее часто неспецифические реакции на туберкулин отмечаются у животных, сенсибилизированных атипичными микобактериями. Немаловажную роль в такой сенсибилизации играют сапрофитные микобактерий, которые в отличие от туберкулезных микобактерий, апатогенны как для человека, так и для животных. Они свободно обитают в природе и их можно выделить как из материала, взятого от здорового животного, так и из патологического материала, и объектов внешней среды (В.H. Васильев, 1971). В.Г. Чепик и др. (1977), Sobiech (1970) наблюдали парааллергическую реакцию у 26% животных, которая держалась от одного до семи месяцев.
Поданным Л.М. Ходуна (1997) атипичные микобактерии широко распространены в регионе Западной Сибири и в равной степени персистируют в организме крупного рогатого скота, реагирующих и не реагирующих на туберкулин в благополучных и неблагополучных по туберкулезу пунктах.
Кроме парааллергических реакций, обусловленных атипичными и сапрофитными микобактериями, серьезной помехой в диагностике туберкулеза являются псевдоаллергические реакции на туберкулин, вызываемые факторами не бактериального происхождения. Псевдоаллергические (ложные) реакции мало изучены, а имеющиеся о них данные в литературе весьма противоречивы. Выявить причины возникновения псевдоаллергических реакций на туберкулин значительно
