старых, с низкой упитанностью или с генерализованным туберкулезным процессом реакция на туберкулин может отсутствовать, это так называемая отрицательная анергия. Поэтому при аллергических исследованиях на туберкулез, проводимых в период зимне-весеннего стойлового содержания, остаются не выявленными туберкулезные животные.
В связи с этим массовые диагностические исследования на туберкулез следует проводить летом или осенью, когда животные находятся в хороших условиях кормления и содержания. Установлено также, что аллергическая реактивность зависит от уровня содержания витамина С в организме. При недостатке этого витамина аллергическая реактивность оказывается резко ослабленной, вплоть до полного выпадения. Интенсивность реакции зависит и от места инокуляции туберкулина. Так, в области шеи реакция была специфичной у 96,3% животных, хвостовой складки - у 98,8% животных (Kransis, 1978). Кроме больных, на туберкулин могут реагировать и животные, сенсибилизированные атипичными и сапрофитными микобактериями, о чем более подробно будет изложено в следующем разделе. Несмотря на имеющиеся недостатки, аллергическая диагностика приобрела широкую популярность и является основным методом массовой диагностики туберкулеза у крупного рогатого скота. В необходимых случаях для подтверждения показаний туберкулиновой реакции проводят контрольно-диагностический убой животного.
Патологоанатомический метод.
Обнаружение туберкулезных изменений в тушах убитых животных играет важную роль в диагностике болезни. Поэтому инструкцией по борьбе с туберкулезом предусмотрено в хозяйствах, благополучных по туберкулезу крупного рогатого скота, при выявлении единичных положительно реагирующих на туберкулин животных подвергать их контрольному убою с последующим тщательным патологоанатомическим исследованием. В случае выделения более 10 - 20 положительно реагирующих животных контрольному убою подвергают 5-10 голов, остальных изолируют.
Послеубойный осмотр животных следует проводить особенно тщательно. В области головы обращают внимание на средние и латеральные заглоточные, подчелюстные и околоушные лимфоузлы. Осмотр ливера начинают с легочных лимфоузлов: левого и правого бронхиальных, а также средостенных (краниальные, средние и задние). Все лимфоузлы разрезают по длине на тонкие пластинки. Легкие исследуют пальпацией и путем поперечных разрезов толщиной 10 - 15 см. Осматривают и другие органы (печень, селезенку, почки). При осмотре вымени делают продольный разрез каждой доли и надвымянных лимфоузлов. Из пищеварительных органов исследуют серозную оболочку кишок и вскрывают все брыжеечные лимфоузлы. Обследуют предлопаточные, глубокие шейные, поверхностные паховые, глубокие паховые и другие лимфоузлы туши.
У коров первичный туберкулезный процесс в 94% случаёв обычно локализуется в легких, бронхиальных, средостенных, а в остальных случаях в заглоточных лимфоузлах. Макроскопически сформировавшийся туберкулезный узелок представляет собой плотное округлое образование различной величины. Центральная его часть желтовато-белого цвета, крошится наподобие творога (казеозный некроз), в ней можно увидеть и прощупать крупинки извести. По периферии располагается серовато-белый пояс грануляционной ткани.
Bo всех случаях, когда обнаруживают туберкулезные изменения и когда их не выявляют, проводят лабораторные исследования. Материал для лабораторного исследования нужно брать сразу же после убоя животного/вырезая кусочки размером 10 - 15 мм в длину, 5 - 10 мм - в ширину и З - 4 мм в толщину. Кусочки паренхиматозных органов и лимфоузлов помещают в чистую стеклянную посуду и заливают фиксирующей жидкостью. Для бактериологических исследований материал фиксируют 30 %-ным водным раствором глицерина, для гистологических исследований - 8 - 10 %-ным раствором формалина.
Лабораторные методы диагностики.
B лаборатории материал исследуют бактериоскопическим (световая и люминесцентная микроскопия), бактериологическим (выращивание на искусственных питательных срёдах), биологическим (биопроба на морских свинках, кроликах и курах) и гистологическим методами.
Бактериоскопический метод. Для прижизненного диагноза используют молоко, бронхиальную слизь, фекалии, истечение из влагалища, иногда сперму и мочу; для посмертного - кусочки пораженных и непораженных паренхиматозных органов: легких, печени, селезенки, а также лимфоузлов.
B лаборатории прежде всего проводят бактериоскопию мазков, окрашенных по Цилю - Нильсену, или используют люминесцентный метод. Данный способ окраски основан на тинкториальном свойстве микобактерий принимать красный цвет (по Цилю -Нильсену) и сохранять устойчивость при воздействии кислот и щелочей.
Люминесцентный способ основан на способности микобактерий к окрашиванию люминесцирующими красителями и свечению под действием сине-фиолетового освещения. От каждого органа готовят по два мазка. B каждом окрашенном мазке просматривают под микроскопом не менее 50 полей зрения. Более чувствительным считается люминесцентный метод. Разработан ускоренный метод выделения туберкулезных микобактерий из молока с помощью прямого флуорохромирования. При этом, в 100% случаев результаты подтверждены классическими исследованиями - заражением животных и выделением чистой культуры (В.M. Карташова, 1976). Однако как положительные; так и отрицательные результаты световой и люминесцентной микроскопии следует подтверждать, особенно при
первичном диагностировании, бактериологическими и биологическими методами исследования.
B необходимых случаях рекомендуется использовать методы обогащения исследуемого материала путем флотации и седиментации, что значительно повышает вероятность обнаружения микобактерий.
Бактериологическая диагностика туберкулеза имеет определенные преимущества по сравнению с бактериоскопическими методами. Она дает положительные результаты даже при наличии в 1мл исследуемого материала небольшого количества (20 - 100) микробных клеток, тогда как установить туберкулез микроскопическим методом удается только в тех случаях, когда в 1 мл исследуемого материала содержится нё менее 100 тыс. микобактерий (Р.0. Драбкина,1968).
B основе культивирования микобактерий лежит их способность размножаться in vitro на соответствующих питательных средах. Чтобы получить чистые культуры возбудителя туберкулёза, материал подвергают предварительной обработке. Предложено много методов патологического материала с применением кислот, щелочей и других веществ, которые гомогенизируют материал и убивают сопутствующую микробную флору. Выбор метода зависит от свежести исследуемого материала. Наиболее часто применяют общеизвестные методы А.П. Аликаевой, Гона, Левёнштейна, Сумиоши, Мазура и др.
Обработанный для исследования материал высевают в 5 - 10 пробирок с яичной средой и инкубируют в термостате при 37 °С. Для выявления начального роста, пробирки с посевами просматривают не реже одного раза в неделю. Если обнаруживается рост, то у выделенных культур изучают характер колоний, тинкториальные свойства при окраске по Цилю - Нильсену, морфологические и культурные свойства путем пересева на различные питательные среды, МПА, МПБ, культивируя их при разных температурных режимах: 20 - 22°, 37 - 38° и 45° С.
Для более раннего выявления микобактерий туберкулеза предложен метод микрокультивирования, модифицированный в 1941 г. Праисом. Данный метод в отличие от классического позволяет поставить диагноз за 5 - 10 дней (Р.В. Пожалови др., 1965; Варец, 1972).
Сравнительным изучением искусственных питательных сред, применяемых в практических лабораториях различных стран, установлено, что на жидких питательных средах (Банича, Школьниковой и картофельной среде с сывороткой) при посеве любого патологического материала рост туберкулезных микобактерий обнаруживается к 12-му дню, а на яичных, средах Гельберга и Левенштейна - Иенсена - к 30-му. B ветеринарных бактериологических лабораториях рекомендуется пользоваться пируватсодержащей средой (Н.А. Александров, 1974) или средой Гельберга, но исследуемый материал обрабатывают предварительно 5% раствором щавелевой кислоты, которая слабо влияет на микобактерии туберкулеза и
