Современные методы диагностики и меры борьбы с туберкулезом крупного рогатого скота

которой многие исследователи оценивают клеточный иммунитет (X. Шютт, 1979).

Установлено, что лимфоциты, взятые у лищ положительно реагирующих на туберкулин, при культивировании в присутствии ППДтуберкулина подвергаются митозу, тогда как лимфоциты лиц, отрицательно реагирующих на туберкулин, при культивировании в тех же условиях митозу не подвергаются. Эти наблюдения и определили возможность использования реакции бластрансформации лимфоцитов для изучения иммунитета. Под действием специфического антигена до 35%, а под действием фетогемагтлютинина ФГА - до 90 % лимфоцитов переходят в бласты (0.Е. Вязов, Ш.X. Ходжаев, 1973).

Лимфоциты, трансформирующиеся в бласты под влиянием специфического антигена, относятся к В-(антителопродуцирующим) и Т (ответственным за клеточный иммунитет) - клеткам и воспроизводимая in vitro реакция бласттрансформации - аналогична, реакции in vivo; она является начальным этапом иммунного ответа (Э.Н. Шляхов, 1977) .

Бласттрансформация представляет собой ранний этап процесса распознавания лимфоцитами чужеродных антигенов, она сопровождается усилением синтеза ДНК и последующим делением бластов (А.С. Шевелев, 1978). Если в культуре с антигеном бласты присутствуют в большем количестве, чем в культуре без антигена, то это является доказательством наличия клеточного иммунитета (М.М. Авербах, В.И. Литвинов, 1972; У.Д. Герберт, 1974). Показатели РБТ лимфоцитов возрастают в случае повышения устойчивости организма к туберкулезу и снижаются при ее падении.

Показателем наличия противотуберкулезного иммунитета в привитом вакциной БЦЖ организме считается также персистенция в нем микобактерий БЦЖ в виде Л-формы. 3.Н. Качемасов (1968, 1969, 1970) и др. выявили у микобактерий туберкулеза так же, как и у многих других, видов микроорганизмов, способность персистироваться, т.е. образовывать Л- формы. Последние длительно сохраняются и могут дать реверсию в исходный микробный вид с восстановлением вирулентности.

Оставалась неизвестной форма персистирования в организме иммунизированных микобактерий вакцинного штамма БЦЖ. Было доказано, что микобактерии БЦЖ в организме проходят несколько фаз: адаптации - 15 дней; максимального развития (вегетирования) - до 50 дней после вакцинации; стационарного вегетирования - до 150 дней; постепенного угасания. С 5 - 11 мес. с момента, вакцинации микобактерий БЦЖ в организме не выявляются (0.Р. Драбкина, 1959; А.И. Каграманова, 1961). Однако фактором, обусловливающим иммунитет при туберкулезе, А. Кальметт и его школа считали наличие в организме живых бактерий, что лежит в основе существующих взглядов и на БЦЖ как на фактор индуцирующий иммунитет. По данным многочисленных исследователей, иммунитет после вакцинации БЦЖ развивается 1 - 3 месяца, держится на высоком уровне 2 -3 года и в определенной степени сохраняется до 6 - 7 лет

(Л.А. Митинская, 1966, и др.). Таким образом, сроки выведения из организма микобактерий вакцинного штамма БЦЖ и длительность иммунитета не совпадали, к тому же не было известно о судьбе микобактерий БЦЖ в организме вакцинированных. В последующем Н.Л. Шмелев, И.Р. Дорохова и 3.С. Земскова обнаружили у микобактерий БЦЖ способность образовывать Л-формы, т.е. персистироваться в привитом организме в Л-форме длительное время, поддерживая противотуберкулезный иммунитет.

Исследованиями И.Р. Дорожковой (1974) установлено, что уже через 2 недели после вакцинации из лимфоузлов выделяются наряду с бактериальными формами и Л-формы. По мере увеличения срока с момента вакцинации процесс Л-трансформации постепенно углублялся: до 5 мес. выделялась смесь Л-формы и БЦЖ, после 5 мес. бактериальные формы обнаруживались лишь в единичных случаях, к 11 месяцам имелись только Л- формы. Все эти факты свидетельствуют о том, что специфический иммунитет противотуберкулезной инфекции существует довольно длительно в результате индуцирования микобактериями или их антигенами.

Для изучения напряженности поствакцинального иммунитета у крупного рогатого скота, привитого вакциной БЦЖ, использовали клеточную реакцию бласттрансформации лимфоцитов (М.А. Сафин, 1976). У животных, исследованных РБТЛ после иммунизации, отмечалось активное бластообразование (табл. 6). В мазках, окрашенных азур-эозином, лимфоциты имели характерные круглой формы ядра. Последние были плотными, располагались чаще эксцентрически, в узком поясе цитоплазмы. Наблюдались весьма значительные колебания в размерах лимфоцитов

Лимфобласты в отличие от лимфоцитов имели большое ядро, неравномерно распределенный хроматин, выраженную перинуклеарную зону; они отличались также размером и конфигурацией цитоплазмы. Ядра чаще имели вид «формы Ридера». В мазках лимфобласты обычно располагались группами, по 2 – 3 и более. Таблица 6. Результаты реакции бласттрансформации лимфоцитов у крупного рогатого скота.

Примечание: доза туберкулина 60 мкг/мл.

В группах животных, вакцинированных БЦЖ, отмечалось бластообразование до 12 - 17% лимфоцитов.

У животных, клинически здоровых и не привитых БЦЖ, реакция бласттрансформации лимфоцитов со специфическим антигеном ППД чаще была отрицательной или же не превышала 3%.

У животных, зараженных, возбудителем туберкулеза, отмечалось резкое угнетение бластообразования. В культурах лимфоцитов под влиянием ППД образовалось в среднем 1,5% бластов, при контроле - 0,5%. Большая часть бластов у данных животных, под действием антигена ППД подвергалась разрушению.

Таким образом, результаты исследований показали, что у животных, иммунизированных вакциной БЦЖ, продолжительность аллергической реакции на внутрикожное введение туберкулина не превышает обычно 10 - 12 мес. Но реакция стимуляции бласттрансформации в культуре лимфоцитов периферической крови у этих животных под влиянием туберкулина сохраняется годами.

Следовательно, РБТ лимфоцитов in vitro позволяет судить о наличии и напряженности клеточного иммунитета у крупного рогатого скота против туберкулезной инфекции.

При изучении напряженности и продолжительности иммунитета у вакцинированных БЦЖ животных мы также определяли формы персистирования микобактерии БЦЖ в организме (М.А. Сафин, 1980). Исследования проводили по методу Дорожковой (1974), а также бактериологически и с помощью биологической пробы на морских свинках (табл. 7). Материалом для исследования служили лимфоузлы и паренхиматозные органы вакцинированных БЦЖ животных, взятые асептически сразу после убоя в различные сроки после проведения вакцинации (от 1 лет).

Таблица 7. Результаты микробиологического исследования материала, полученного от телят, вакцинированных БЦЖ.

У всех культур изучали морфологические и культуральные особенности, а также вирулентность для лабораторных животных. Культуры, представляющие собой смесь бактериальных и нестабильных Л-форм микобактерий БЦЖ, на плотных питательных средах дали рост в виде сухих