труднее, чем парааллергических. Ряд исследователей причину псевдоаллергических реакций связывают с наличием различных паразитов. Однако другие авторы отрицают возможность сенсибилизации организма к туберкулину, например, при фасциолезе, эхинококкозе и дикроцеллиозе. Некоторые ученые возникновение псевдоаллергических реакций связывают с гнойно-некротическими процессами в организме (А.И. Протасов, 1960; A.И. Бокун и др., 1977), травматическим ретикулитом (Д.Д. Новак, 1977), сенсибилизацией организма различными грибками (ScukIa, 1971; Hosen, 1978).
B результате лабораторных исследований биоматериала от 14 коров убитых с диагностической целью из двух благополучных хозяйств PT от животных с положительной реакцией на туберкулин выделены две культуры, которые по морфологическим, культуральным, биохимическим и патогенным свойствам отнесены к видам кандида и нокариа. При заражении морских свинок данными культурами доказана их сенсибилизирующая роль к туберкулину (Госманов Р.Г., Сафина Ч.М., 1997). У крупного рогатого скота, кур и морских свинок наблюдали псевдоаллергические реакции при добавлении в их корм мочевины (Е.H. Буряк, 1968; П.И. Кокуричев, 1969; З.С. Газарах и А.Н. Кузяев,1972). Однако B.И. Ротов и др. (1975) при добавлении карбамида в рацион, не сбалансированный по белку, псевдоаллергических реакций на туберкулин не обнаруживали.
Отдельные исследователи возникновение неспецифических реакций связывают с вакцинацией крупного рогатого скота против бруцеллеза (X.Г. Гизатуллин, 1957), ящура (Kosjan, 1965). B.И. Ротов и др.(1957) наблюдали псевдоаллергические реакции на туберкулин, обусловленные длительной транспортировкой и акклиматизацией животных.
Дифференциальная диагностика неспецифических реакций от специфических остается пока проблемой. Предложены различные методы дифференциации неспецифических туберкулиновых реакций от специфических при жизни животного и после убоя. Особо важное значение приобретают прижизненные методы дифференциации. C этой целью предложено много способов.
Многие исследователи рекомендуют пользоваться одновременно двумя туберкулинами - бычьим и птичьим, полагая, что параи псевдоаллергические реакции более выражены на птичий туберкулин, чем на туберкулин для млекопитающих. Однако В.E. Шуревский (1980), H.П. Овдиенко, А.И. Кузин (1980) считают, что симультанная проба в ряде случаев не позволяет дифференцировать неспецифические реакции на туберкулин, поэтому рекомендуют применять одновременно аллергический и серологический (РНГА) методы. B целях дифференциации подобных реакций на туберкулин Ruchford (1964) предлагает вводить аллерген в хвостовую складку. 0 выявлении животных - носителей атипичных микобактерий - с помощью гомологичного туберкулина сообщают А.H. Шаров (1961), Г.M. Молявский (1964). Предложен для этой цели и
комплексный аллерген (КAM) из атипичных микобактерий (А.H. Шаров, 1978).
E.B. Смирнов и др. (1970), А.А. Солонеко (1977) изучали показатель повреждения нейтрофилов (ППН) и установили, что у животных, зараженных атипичными микобактериями, ППН отрицательный, а у зараженных микобактериями туберкулеза - положительный.
А.Л. Шабад и др. (1963), А.И. Кузин (1966), А.С. Латышев (1968), И.А. Измайлов и др. (1968), А.С. Донченко и др. (1971), И.Т. Нечваль и др. (1973) считают возможным дифференцировать неспецифические реакции на туберкулин внутривенной туберкулиновой пробой. Lutsevich (1976), Merkal (1977) предлагают для этой цели реакцию бласттрансформации лимфоцитов (РБТЛ).
При наличии неспецифических реакций на туберкулин у крупного рогатого скота в постановке правильного диагноза и разработке мер борьбы рекомендуется следующий подход.
Если в ранее благополучном по туберкулезу хозяйстве туберкулинизацией выделяются животные с нехарактерными реакциями на туберкулин, спешить с объявлением хозяйства неблагополучным по туберкулезу не следует. Необходимо провести контрольно-диагностический убой нескольких животных и материал от них исследовать на туберкулез в лабораторных условиях согласно действующей инструкции. Остальных животных, реагирующих на туберкулин, нужно изолировать от основного поголовья и через 30 - 45 дней подвергнуть повторной туберкулинизации симультанной аллергичёской пробой с туберкулином и комплексным аллергеном из атипичных микобактерий (КAM) согласно наставлению.
B тех хозяйствах и стадах крупного рогатого скота, где симультанная проба с KAM не позволяет отдифференцировать неспецифические реакции, можно применять последовательно другие методы дифференциации неспецифических реакций на туберкулин:
-
При жизни животных, выделенных с аллергической реакцией на туберкулин:
-
реакция бласттрансформации лимфоцитов; через 12 дней после туберкулинизации;
-
реакция специфического лизиса лейкоцитов; через 12 дней после
-
туберкулинизации;
-
надплевральная новокаиновая блокада; за 6 дней до повторной
-
туберкулинизации;
-
внутривенное введение 10% раствора хлористого кальция;
-
повторная туберкулинизация через 30 - 45 дней с туберкулинами ППД и КАМ;
-
внутривенная туберкулиновая проба.
-
Контрольно-диагностический убой двух-трех животных:
-
макроскопические исследования;
-
бактериоскопия;
-
посевы на питательные среды;
-
биопроба на морских свинках;
-
гистологические исследования.
-
Заражение и последующий убой лабораторных животных:
-
макроскопические исследования;
-
бактериоскопия;
-
посевы на питательные среды;
-
биопроба на морских свинках, 2-й пассаж.
Реакция бласттрансфорцации лимфоцитов (РБТЛ) - это превращение малых лимфоцитов под влиянием неспецифических и специфических воздействий в бласты - молодые клетки с крупным ядром и базофильной цитоплазмой. Для постановки реакции чаще всего используют лимфоциты периферической крови. При воздействии туберкулином на лимфоциты животных, больных туберкулезом, бластообразование в среднем составляет 9,18 ± 0,94%. По мере прогрессирования туберкулезного процесса блаетообразование подавляется и составляет 0,4 ± 0,08%.
У здоровых животных и у животных, реагирующих не специфически на туберкулин, бластообразование лимфоцитов находится постоянно на одном уровне и в среднем составляет 0,89 ± 0,22% (M.В. Харитонов, 1981, 1982).
Кровь берут из яремной вены (не более 10 мл) в биологические пробирки размером 20x200 мм, в которые предварительно добавляют гепарин (для инъекций) из расчета от 4 до 25 единиц на 1мл крови. Содержимое перемешивают путем 2 - 3-кратного перевертывания пробирок и оставляют на 5 - 6 часов при комнатной температуре в горизонтальном положении, под углом 10°С. Через 5 - 6 ч пробирки ставят на 15 - 20 минут под углом 45°С. При этом, между эритроцитами и плазмой, накапливается значительное количество лимфоцитов в виде дымчатой пленки. Плазму крови вместе с лимфоцитами отсасывают и переносят во флаконы для постановки реакции бласттрансформации лимфоцитов. Подсчитывают количество лейкоцитов и плазму разводят средой 199 с антибиотиками так, чтобы в 1 мл плазмы было 1 млн. лейкоцитов.
Полученную взвесь разливают по 5 мл в 2 флакона, в один из них добавляют в качестве антигена ППД туберкулин из расчета 60 мкг/мл, а второй оставляют без антигена - он служит контролем. Флаконы закрывают тугими резиновыми пробками и выдерживают 5 суток в термостате при температуре 37°С. После этого флаконы встряхивают, содержимое переливают в центрифужные пробирки. После 10 минутного центрифугирования (1000 об/мин) верхний слой сливают, а из осадка делают тонкие мазки, которые фиксируют метанолом и красят по Романовскому - Гимзе. B окрашенных мазках проводят подсчет лимфоцитов и бластов. В каждом мазке подсчитывают не менее 200 клеток. Выводят соотношение бластов к лимфоцитам в процентах.
