Реакция специфического лизиса лейкоцитов (РСЛЛ ) основана на разрушении лейкоцитов под влиянием аллергена - туберкулина. Для постановки реакции в пробирку, содержащую 0,1 единиц гепарина, вносят 5мл крови, взятой из яремной вены животного, и перемешивают. Затем из этой пробирки вносят по 0,9 мл крови в две другие пробирки. B одну из них добавляют 0,1 мл туберкулина (опытная), а в другую 0,1 мл физраствора (контрольная). Жидкость в пробирках перемешивают и инкубируют 2 ч при 37 °C при периодическом легком встряхивании. После этого, подсчитывают количество лейкоцитов в опытной и контрольной пробирках в камере Горяева по общепринятой методике и вычисляют показатель РСЛЛ в процентах по формуле: РСЛЛ = (Лк - Ло) / Лк 100, где Лк - количество лёйкоцитов в контрольной пробе, Ло - количество лейкоцитов в опытной пробе с аллергеном.
РСЛЛ считают положительной у крупного рогатого скота при показателе 10% и более (10...20...35.....±2,05). У здоровых животных показатель РСЛЛ не превышает в среднем 6,57±0,30. Надплевральная новокаиновая блокада по В.В. Мосину . B хозяйствах, условно благополучных по туберкулезу, животным, реагирующим на внутрикожное введение туберкулина, с целью дифференциации неспецифических туберкулиновых реакций за 6 дней до повторной туберкулинизации делают надплевральную новокаиновую блокаду по В.В. Мосину.
Оценка туберкулиновых реакций при повторной туберкулинизации следующая: неспецифические реакции на туберкулин исчезают, а у животных, инфицированных возбудителем туберкулеза, она сохраняется (М.В. Харитонов, 1982).
Техника надплевральной новокаиновой блокады по В.В. Мосину сводится к введению впереди ножек диафрагмы в надплевральную клетчатку, окружающую пограничный симпатический ствол и чревные нервы, 0,5%ного раствора новокаина. У основания последнего ребра с обеих сторон подготавливают операционное поле. Стерилизуют шприц и две инъекционные иглы длинной 12 -14 см диаметром 2 мм. Определяют место, направление и глубину введения иглы. Делается это так: указательным пальцем правой руки прощупывают передний край последнего ребра и затем палец продвигают по нему до дорсальной группы позвоночных мышц. При надавливании в этом месте между подвздошно-реберной, и длиннейшей мьшщами спины прощупывают желобок, который у крупных животных находится латеральнее сагитальной плоскости на ширину ладони. Точка пересечения переднего края последнего ребра с латеральным краем длиннейшей мышцы спины является местом укола.
Предварительно кожу, подкожную клетчатку и мышцы в месте введения иглы инфильтрируют 0,5%-ным раствором новокаина. После этого под углом 30 - 35° к горизонтальной плоскости вводят иглу и продвигают ее параллельно переднему краю ребра до упора в тело предпоследнего грудного
позвонка. Достоверность данного положения определяют тем, что из иглы не вытекает кровь и через нее в плевральную полость не всасывается воздух.
Убедившись в правильности положения иглы, фиксируют её левой рукой, а правой присоединяют шприц с 0,5%-ным раствором новокаина. Потом, слегка надавливая большим пальцем правой руки на поршень шприца, левой изменяют положение иглы, отклоняя ее вместе со шприцем на 5 - 10° к сагитальной плоскости. Благодаря этому конец иглы несколько отходит от тела позвонка и принимает направление, параллельное вентролатеральной поверхности тела позвонка.
Равномерно надавливая на поршень шприца, иглу плавно продвигают вперед до момента свободного вхождения раствора новокаина в надплевральную клетчатку. B мышечную ткань раствор новокаина поступает с определенным сопротивлением. После прохождения иглы через мышечную ткань и попадания в надплевральную клетчатку раствор начинает поступать в неё свободно. В это время следует убедиться в правильности положения конца иглы. Для этого от иглы отъединяют шприц. Если конец иглы находится в надплевральной клетчатке, инфильтрированной раствором новокаина, то из иглы выступает раствор. Нередко он колеблется в игле синхронно дыханию.
Крупному рогатому скоту при надплевральной блокаде инъецируют 0,5 мл 0,5%-ного раствора новокаина на 1 кг массы животного. Общую дозу новокаина вводят равными порциями (примерно по 80 – 130 мл с каждой стороны). Подавление неспецифических туберкулиновых реакций раствором хлористого кальция. B условно благополучных по туберкулёзу хозяйствах, где крупный рогатый скот реагирует на туберкулин, а при лабораторных исследованиях материала от них туберкулез не подтверждается, реагирующим животным рекомендуется ежедневно вводить строго внутривенно по 150 мл 10%-ного раствора хлористого кальция 4 дня подряд. Затем через 30 - 45 дней проводят повторную туберкулинизацию этих животных согласно действующей инструкции. При этом неспецифические реакции на туберкулин исчезают, а интенсивность специфических реакций у животных, действительно зараженных туберкулезом, не снижается (M.А. Сафин, 1975).
Внутривенная туберкулиновая проба (проба Коха) . Из группы животных, подозреваемых в заболевании туберкулезом, отбор для контрольно-диагностического убоя проводят с помощью внутривенной туберкулиновой пробы.
Сущность данной пробы заключается в следующем. У животных с наиболее выраженной аллергической реакцией на внутрикожное введение туберкулина (3 - 5 голов) определяют среднесуточную температуру тела. Затём им внутривенно вводят туберкулин для млекопитающих из расчета 1 мл на 100 кг массы животного (2 - 5 мл). Через 3, 6, 9 часов после введения туберкулина у животных измеряют температуру и результаты сравнивают со
среднесуточной. Одновременно проводят клиническое наблюдение за животными. У животных, инфицированных туберкулезом, отмечаются угнетенное состояние, учащенное дыхание, отказ от корма и повышение температуры тела на 1°С и более выше среднесуточной. У здоровых животных клиническое состояние не меняется, температура тела повышается не более чем на 0,7 - 0,8°С.
Для окончательного решения вопроса о неспецифичности туберкулиновых реакций животных, которые дали наиболее четкую реакцию по одному из перечисленных способов, подвергают диагностическому убою, при этом туши и внутренние органы исследуют по описанной схеме.
C целью выяснения причин возникновения реакции на туберкулин в стадах, где наличие туберкулеза не подтверждалось, мы исследовали материал, взятый от 488 голов крупного рогатого скота. При лабораторных исследованиях материала из восьми хозяйств выделено 26 культур, в том числе 17 беспигментных и 9 пигментных. Ha основании изучения культуральных и биологических свойств они отнесены к атипичным микобактериям. B шести хозяйствах выяснить причину, обусловливающую неспецифические реакции на туберкулин, не удалось, хотя был подвергнут послеубойному осмотру и лабораторным исследованиям материал более чем от 120 животных, реагировавших на туберкулин.
B течение продолжительного времени (5 - 10 лет) мы вели наблюдения за состоянием животных в этих хозяйствах и ни в одном из них заболевание туберкулезом не подтверждалось, хотя туберкулиновые реакции периодически выявлялись. Например, в одном хозяйстве только за год было выявлено 70 коров положительно и 124 сомнительно реагирующих на туберкулин. Из них 18 животных были убиты и материал от них исследовали на туберкулез в Республиканской ветеринарной лаборатории. При этом от части животных получили на седьмой день рост культур беспигментных атипичных микобактерий, которые на, основании бактериологических и биологических исследований мы отнесли к третьей группе по классификации Раниона.
Аналогичные культуры были выделены от трех коров и при последующих исследованиях. B дальнейшем, контрольные туберкулинизации крупного рогатого скота в этом хозяйстве проводились 2 - 3 раза в год. Реагирующих животных оставляли в хозяйстве в условиях изоляции. Наблюдение вели в течение 10 лет. B стаде было оставлено более 100 коров, положительно реагировавших на туберкулин, но ни одна из них впоследствии не заболела туберкулезом.
Анализ динамики аллергических реакций у животных в данном хозяйстве показал, что неспецифические реакции, обусловленные атипичными микобактериями, встречаются у животных в различные сезоны года, но наибольшее количество реагирующих животных регистрируются в апреле и мае - 30,5- 29,3%, наименьшее - в декабре - 4,4% (таблица 5).
