ВОЗБУДИТЕЛЬ ТУБЕРКУЛЕЗА
Возбудитель туберкулеза относится к порядку Actinomycetales, семейству Mycobacteriaceae, роду Myeobacterium. Он открыт Кохом в 1882 г.
Родовое название микобактерии указывает на родство этих бактерий с грибами. Микобактерии обладают особым признаком, отличающим их от остальных микробов - они устойчивы к кислотам, щелочам и спиртам. Род микобактерии включает много различных видов, патогенных и непатогенных для животных.
Микобактерия имеет форму тонкой палочки, иногда прямой, чаще слегка изогнутой, с несколько округленными концами. Длина палочек колеблется от 0,8 до 3 - 5 мкм, ширина - от 0,2 до 0,5 мкм. По мере старения культуры микобактерии образуют кокковые формы.
В культурах возбудителя бычьего вида они появляются после 3 - 4 недель роста (Р.0. Драбкина, 1963). Микобактерии туберкулеза спор не образуют, жгутиков и капсул не имеют, по методу Грама окрашиваются положительно.
Электронной микроскопией установлено, что клетка имеет тонкую, состоящую из трех слоев стенку, которая выполняет механическую защитную функцию. В средней части клетки выявляете зернистость (количество зерен в цитоплазме от 2 до 12) форма величина зерен различные. Характерным, хотя и изменчивым свойством является их кислотоустойчивость: клетки окрашенные горячим фенольным раствором основного фуксина, сохраняют цвет и при последующей обработке неорганической кислотой (разбавленной серной или соляной). Все другие бактерии, окрашенные этим способом, быстро обесцвечиваются под действием кислоты. Кислотоустойчивость обусловлена очень высоким содержанием сложных липидов в клеточных стенках, благодаря которым микобактерии покрываются восковым налетам и приобретают сильную гидрофобность. Поэтому колонии на плотных питательных средах имеют сухую шероховатую, морщинистую поверхность, а в жидких культурах клетки слипаются, образуя на поверхности среды плотную пленку.
Обращает на себя внимание выраженный полиморфизм, бактерии туберкулеза имеют разную величину, форму и строение. У них, как и у других микробов, четко выделяется клеточная стенка, цитоплазматическая мембрана и ядерное вещество - нуклеоид.
Виды туберкулезных микобактерий. Проблема определения видов микобактерий, несмотря на свою длительную историю, не потеряла свою актуальность и в настоящее время. Это обусловлено тем, что от установления вида возбудителя, вызвавшего патологический процесс, зависит тот или иной комплекс профилактических мероприятий. Кроме того, нельзя не считаться с наличием в природе так называемых условно-патогенных (атипичных и сапрофитных) микобактерий.
C учетом морфологических, культуральных и биологических особенностей возбудителя различают следующие виды микобактерий туберкулеза:
-
Человеческий (M. tuberculosis) – вызывает заболевание у человека;
-
Бычий (M. bovis) – вызывает заболевание у крупного рогатого скота;
-
Птичий (M. avium) – вызывает заболевание птиц.
Bce виды микобактерий туберкулеза, в отличие от широко распространенных сапрофитных микобактерий, имеют свои морфологические особенности. Они хорошо окрашиваются по ЦилюНильсену, тогда как сапрофитные микобактерии отличаются неравномерностью окраски и отсутствием четких границ на концах палочек. B мазках после окрашивания для люминесцентного изучения туберкулезные микобактерии светятся ярко-золотистым светом, сапрофитные микобактерии люминесцируют желтым, синим или зеленым светом, а не редко вообще не светятся. Если мазки после окраски по Цилю - Нильсену дополнительно обработать в течение 45мин 0,01%-ным раствором гипохлорита калия, то микобактерии туберкулеза сохранят прежнюю окраску, а сапрофиты потеряют кислотоустойчивость и полностью обесцветятся. Эти различия можно использовать ориентировочно для дифференциации туберкулезных микобактерий от сапрофитных.
Микобактерии туберкулеза человеческого вида более вирулентны для человека, морских свинок, мышей и хомяков, менее - для кроликов и сельскохозяйственных животных. Они растут в виде кос (cord factor), образуют шероховатые колонии со складчатой поверхностью; на питательных средах, содержащих глицерин, дают обильный (эйгонический) рост. На плотных яичных средах эти бактерии растут в виде сухих крошковатых колоний неправильной формы. Бактерии содержат много никотиновой кислоты (ниацина), из энзимов - уреазу, никотинамидазу, пиразинамидазу, эстеразу, липазу, нитратредуктазу и других веществ.
Микобактерии туберкулеза бычьего вида наиболее вирулентны для крупного рогатого скота, кроликов, морских свинок, белых мышей, хомяков, менее - для овец, коз, свиней, кошек, диких животных и человека. При посеве на поверхность глицеринового бульона они растут медленно при температуре 37 - 38°С, на плотных средах образуют колонии в виде сухих крошек (дисгонический рост). При посеве в жидкую или полужидкую среду, дают рост в глубине среды, но не на поверхности - это является отличительной чертой микобактерий бычьего вида от человеческого. Отдельные штаммы бычьего вида в пересевах часто изменяют рост, который становится эйгоническим, как и у штамма человеческого вида: они содержат мало ниацина. Из энзимов микобактерии бычьего вида содержат уреазу, но не имеют нитратредуктазы и пиразина мидазы.
Микобактерий птичьего вида слабовирулентны для морских свинок, крупного рогатого скота, человека, но вирулентны для домашних и диких птиц, кроликов, свиней. Оптимальная температуpa роста - 40°С. Бактерии
образуют гладкие мягкие колонии или сплошной слизистый налет. При культивировании на твердых средах они формируют кольцеобразные колонии с валикоподобными краями, что не бывает у микобактерий человеческого и бычьего видов (Р.В. Тузова, 1975). Бактерии не содержат ниацина, а из энзимов имеют никотинамидазу, пиразинамидазу.
Морфологические и культуральные признаки при определении вида микобактерий имеют лишь относительное значение, поэтому часто используют биохимические методы, которые учитывают различие ферментативной активности микобактерий разных видов, а также их физиологию. У микобактерий туберкулеза, как и у всех патогенных микроорганизмов, самым важным свойством для сохранения вида является виpулeнтность, т. е. способность размножаться и вызывать гибель животного того или иного вида при определенных дозах и способах введения (Ю.К. Вейсфейлер, 1975). Поэтому наиболее достоверные результаты дифференциации видов микобактерий дает различная чувствительность к ним лабораторных животных.
При биологическом методе определения видов микобактepий берут трех кроликов и трех морских свинок. Каждому животному вводят по 1 мг бактериальной массы исследуемой культуры (кроликам - внутривенно, морским свинкам - подкожно). Микобактерии туберкулеза бычьего вида в период от 3 недель до 3 месяцев после заражения вызывают у кроликов и морских свинок генерализованное поражение; микобактерии туберкулеза человеческого вида - только генерализованное поражение у морских свинок, а у кроликов - лишь заболевание с незначительными туберкулезными поражениями. Микобактерии птичьего вида через 11 - 30 дней вызывают гибель кроликов от сепсиса (тип Йерсена). K микобактериям птичьего вида морские свинки нечувствительны.
Степень вирулентности микобактерий туберкулеза определяют на морских свинках. При этом в зависимости от дозы вводимого под кожу патматериала результаты учитывают по продолжительности жизни экспериментальных животных, а также по характеру и тяжести поражения внутренних органов.
Культуры, убивающие морских свинок в сроки до 1,5 мес., считаются высоковирулентными, а в период от 3 до 5 мес. - слабовирулентными. По данным Р.0. Драбкиной (1949), наиболее убедительные результаты получены при установлении продолжительности жизни лабораторных животных, зараженных 0,1 мг культуры микобактерий туберкулеза. Следует отметить, что вирулентность туберкулезных микобактерий и различных штаммов в пределах вида непостоянна, она может меняться под влиянием различных факторов: снижаться при длительном хранении культуры и быстро восстанавливаться при пассировании через лабораторных животных. Нахождение возбудителя во внешней среде тоже приводит к снижению его вирулентности. B зависимости от вирулентности туберкулезных микобактерий у весьма восприимчивых к ним животных и птиц в одних
