Метод контроля соматических клеток флуоресцентной микроскопией с использованием анализатора соматических клеток DCC
Метод основан на разрушении цитоплазматической мембраны СК под действием лизогенного буфера. При этом ядра клеток становятся доступными для действия флуоресцентного красителя, в качестве которого используется йодид пропидия. Йодид пропидия связывается с двуспиральной ДНК соматических клеток и образует флуоресцентное вещество, поглощающее зелёный свет и излучающее красный, идентифицирующее клетки. Система даёт изображение клеток, а встроенный в анализатор компьютер с помощью программного обеспечения подсчитывает количество белых точек, что соответствует количеству СК. Диапазон измерения от 90 тыс./мл до 1500 тыс./мл.
Прямой метод определения соматических клеток путём микроскопирования
Метод основан на высушивании распределённой на предметном стекле анализируемой пробы сырого молока с последующим окрашиванием мазка и подсчёте с использованием микроскопа количества окрашенных соматических клеток на установленной площади [8].
4.3. Бактериологические исследования
Для определения возбудителей мастита и их чувствительности к лекарственным препаратам из поражённых четвертей вымени (положительные проба отстаивания и реакция с быстрым диагностическим тестом) отбирают молоко (секрет) для бактериологических исследований. Для этого соски вымени протирают ватным тампоном, смоченным 70° спиртом (5 мл на одну четверть) и надаивают 10 мл молока в стерильную пробирку. При взятии проб следят за тем, чтобы сосок не касался края пробирки.
Пробы молока доставляют в ветеринарную лабораторию в течение 3-4 ч с момента взятия в специальных ёмкостях, обеспечивающих температуру не выше 8-10°С, или в термосах со льдом.
В лаборатории из проб молока (секрета) делают посевы на элективные питательные среды для выделения и идентификации основных возбудителей мастита и определения их чувствительности к антимикробным препаратам. Определение проводят не реже одного раза в год.
Корову считают больной скрытой (субклинической) формой мастита, если из трёх использованных тестов (быстрый диагностический тест, проба отстаивания, бактериология) два дают положительный результат (приложение 2) [68].
4.4. Иммунологические методы определения наличия антибиотиков по ГОСТ 32219
Методы определения наличия антибиотиков β -лактамного типа
с использованием тест-набора N 1
Метод основан на иммуноферментной реакции, в процессе которой антибиотики β-лактамного типа захватываются специфическими белковыми рецепторами, меченными ферментом с индикатором, с образованием химически прочного комплекса, блокирующего свойство индикатора изменять цвет продуктов химических реакций.
Наличие антибиотиков устанавливают визуально, сравнивая интенсивность цвета зоны определения антибиотиков с интенсивностью цвета контрольной зоны индикаторного устройства. Большая или равная интенсивность цвета зоны определения антибиотиков по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны свидетельствует об отсутствии антибиотиков в анализируемом молоке. Меньшая интенсивность цвета, а также отсутствие её окрашивания свидетельствует о наличии антибиотиков.
антибиотики присутствуют).
с использованием тест-набора N 2
Метод основан на реакции комплексообразования антибиотиков β-лактамного типа с белковыми рецепторами, содержащимися в лиофилизате, и последующем визуальном выявлении оставшихся свободными рецепторов путём хроматографии на индикаторных полосках хроматографической бумаги, содержащих в виде соответствующих линий реакционную и контрольную зоны.
Сравнивают интенсивность окрашенных в красный цвет зон, появившихся на индикаторной полоске хроматографической бумаги в виде линий. Большая интенсивность цвета зоны определения антибиотиков по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны свидетельствует об отсутствии антибиотиков в анализируемом молоке. Меньшая или равная интенсивность цвета зоны определения антибиотиков по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны, а также отсутствие её окрашивания свидетельствует о наличии антибиотиков.
Методы одновременного определения наличия антибиотиков β -лактамного типа и тетрациклиновой группы
с использованием тест-набора N 3
Метод основан на реакции комплексообразования антибиотиков β-лактамного типа и тетрациклиновой группы со специфическими белковыми рецепторами, меченными коллоидным
